ハーフSIMの基礎、準備および使用



の ハーフSIM これは半固体のディファレンシャル寒天培地で、主に腸内細菌科のいくつかの細菌の同定を助けるように特別に設計されています。それはトリプテン、ペプトン、硫酸鉄、硫酸アンモニウム、チオ硫酸ナトリウムおよび寒天で構成されています.

この媒体は3つの重要なテストの実行を可能にします：硫化水素（H2S）、インドール形成と運動性、したがって頭字語SIM。その大きな有用性のために、それは細菌学研究室で欠けていることができません.

他の媒体とは異なり、これは半固体でなければならないので、一部の細菌の移動能力は検出可能である。この意味で、この試験は腸内細菌科には非常に有効ですが、グラム陰性の非発酵桿菌ではそうではありません。.

ＳＩＭ培地は、他の細菌に対していくつかの細菌を特徴付ける特定の特定の特性を区別することを可能にする。例えば 大腸菌 それはHであることによって区別されます2S（ - ）、インドール（+）、運動性（+） プロテウスミラビリス それはHです2S（+）、インドール（ - ）、運動性（+）.

索引

  • 1財団
    • 1.1電源
    • 1.2硫化水素の製造
    • 1.3インドール形成
    • 1.4運動性
  • 2準備
    • 2.1ハーフSIM
    • 2.2コバック試薬
    • 2.3 Erlich試薬
  • 3つの用途
    • 3.1播種
  • 4品質管理
  • 5制限
  • 6参考文献

財団

それは、その使用が硫化水素を生産することができる微生物とそうでない微生物とを区別することに成功するので、それは差異があると考えられる培地です。それはまたそれを形作らないそれらのトリプトファンからインドールを形作るものを強調し、そして最終的に不動の細菌から運動性を区別する.

電源

任意の培地として、それは要求のない微生物が発生することができるように必要な栄養素を提供する要素を持っています。これらの要素はペプトンとtripteínaによって表されます.

環境中の微生物の発達は、この培地によって評価される特徴の有無を観察することができるために不可欠です。.

硫化水素の製造

頭字語ＳＩＭの文字Ｓは、硫化水素（Ｈ）の生成を指す。2S）硫化水素を形成する能力があるバクテリアはチオ硫酸ナトリウムの硫黄を摂取する.

Hが形成されたら2S - 無色の気体 - これは培地中に存在する鉄塩と反応して、はっきりと見える硫化第一鉄を生成します（黒い沈殿物）。 Hを形成しない細菌2S、元の色の中間を残します（ベージュ）.

黒い沈殿物の存在は運動性の解釈を妨げる可能性があります。しかし、大部分のH産生腸内細菌は知られています。2Sはサルモネラ菌、プロテウス菌、シトロバクター菌などの積極的な運動性です。さらに、培地全体をほぼ覆っている黒い沈殿物は、前向きな運動性を示唆しています。.

インドールトレーニング

頭字語のSIMの2番目の文字は、インドールの形成を表す "I"です。.

この意味で、tripteínaは栄養源であることに加えて、もう一つの基本的な機能を果たします。このペプトンはトリプトファンと呼ばれるアミノ酸が豊富で、それ故に、それはトリプトファナーゼを生産するバクテリアを示すことができます.

この酵素はアミノ酸トリプトファンを切り取る原因となり、その結果としてインドール（無色の物質）、ピルビン酸およびアンモニウムが形成される。.

だからこそ、この反応を実証するためには、顕示物質（Ehrlich試薬またはKovac試薬）を加える必要があります。どちらもインドールと反応し、寒天の表面に輪状の赤フクシア物質を形成します。フクシアリングが現れた場合、インドールテストは陽性と解釈されます。.

この酵素を持たない細菌は環を形成せず、インドール陰性テストとして解釈されます.

試薬を添加すると培地が濁り、運動性を視覚化するのが困難になるため、インドールテストを最後に解釈する必要があることを指摘することが重要です。.

運動性

最後に、単語SIMの文字 "M"は運動性を意味します。運動性を評価することができるためには、この特性は細菌の運動があるかどうかを観察することができるために不可欠であるので、この培地は戦略的に半固体である。べん毛を持つ細菌は、この陽性テストを与えるものです.

最初の接種材料およびその周囲の両方で混濁が観察されたときに、陽性試験が明らかになるだろう。一方、非可動性バクテリアは最初の接種経路でしか発生しません。.

準備

ハーフSIM

脱水媒体30 gを量り、蒸留水1リットルに溶かします。混合物を５分間放置し、次いで完全に溶解するまで頻繁に撹拌しながら沸騰するまで加熱する。.

混合物を綿のふた付き試験管に分配し、121℃で15分間オートクレーブする。チューブラックをオートクレーブから取り出し、直立位置で固化させて、媒体がブロックの形状になるようにします。.

保管のために、使用されるまで冷蔵庫に保管されます。調製培地は７．３±０．２の最終ｐＨを有さなければならない。.

培地を接種する瞬間には、それは室温でなければならない。媒体の色はベージュです.

コバック試薬

１５０ｍｌのアミルまたはイソアミルまたはブチルアルコールを計量する。 （上記の3つのうちの1つを使用してください）.

p-ジメチルアミノベンズアルデヒド10gを溶かす。次に、濃塩酸50mlをゆっくり加えます.

使用できる試薬は無色または淡黄色です。それは琥珀色の瓶に保管し、冷蔵庫に保管してください。それが暗褐色を帯びている場合は使用しないでください。それはそれが破損していることを示します。この試薬は腸内細菌を扱うときに好ましい.

Erlich試薬

2gのp-ジメチルアミノベンズアルデヒドを量り、190mlの無水エチルアルコールに溶かし、40mlの濃塩酸とゆっくり混合する。コバックの試薬も同じように保管してください。 Ehrlich試薬は、非発酵性および嫌気性バクテリアにもっと使用されています。.

用途

SIM培地は、細菌検査室でよく使用されています。それは、同じ管内で腸内細菌科の同定において３つの本質的な特徴が観察され得るという利点を有する。.

播種

この培地を播種するための正しい方法は、針を使用することであり、それによって研究される純粋なコロニーの一部が採取され、そして培地の中心に垂直に挿入される。単一の推力がなされなければならない。穿刺はチューブの底に達してはいけません、正しいことは深さの2/3だけをカバーすることです.

これは肯定的な運動性の誤った解釈につながる可能性があるため、接種物を繰り返すことはお勧めできません。接種された培地は、好気性培養において３７℃で２４時間インキュベートされる。.

Hの生産があったかどうかが観察される時間をまとめました2Sと運動性が読み取られます。最後にインドールが現れ、EhrlichまたはKovacの試薬を3〜4滴加え、それを穏やかに混ぜ合わせて解釈します.

品質管理

無菌対照として、１または２本のチューブを接種なしで３７℃のオーブン中で２４時間インキュベートする。これ以降は色の成長や変化がないことが予想されます。.

品質管理として、以下のような公認の既知の菌株を使用できます。 大腸菌 ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, 肺炎桿菌 ATCC 13883, ネズミチフス菌 ATCC 14028, 赤痢菌 ATCC 29930, 尋常性プロテウス ATCC 13315.

期待される結果は以下のとおりです。 大腸菌 H2S陰性、インドール性および陽性の運動性, Enterobacter aerogenes ポジティブな運動性のみ, ネズミチフス菌 H2Sと正の運動性、負のインドール. 尋常性プロテウス すべてがポジティブ 肺炎桿菌 そして 赤痢菌 すべて否定的.

制限事項

-のいくつかの株 Morganella morganii, 他の菌株の中でも、メラニンの産生のためにこの培地中で褐色の色素を産生することができるが、これは硫化第一鉄の沈殿物と混同されるべきではない。経験の浅い専門家では、この状況はH検定の解釈において誤検出を引き起こす可能性があります。2S.

-厳密な好気性細菌は管の表面でしか増殖しないため、運動性の解釈は困難です。.

参考文献

  1. BDラボラトリーズBBL SIMミディアム。 2008年から入手可能：bd.com
  2. ネオゲン研究所SIMミディアム。ご利用可能な場所：foodsafety
  3. ディフコフランシスコソリアメルギゾ。 SIMミディアム。 2009年に入手可能：http://f-soria.es
  4. ブリズエララボラボラトリーSIMミディアム。利用可能な場所：.brizuela-lab.com
  5. 研究所ブリタニア。 SIMミディアム。 2015年から入手可能：studyres.es/doc
  6. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断第5版社説Panamericana S.A.アルゼンチン.