寒天ミューラーヒントン基礎、準備および使用



の ミュラーヒントン寒天培地 それは、肉注入、カゼイン酸ペプトン、デンプン、寒天および蒸留水からなる固体の非選択的栄養培地です。この培地は、最も急速に増殖している細菌の優れた微生物開発を可能にします。.

それはもともとそのような栄養的に要求の厳しい細菌を分離するためにジョンハワードミューラーとジェーンヒントンによって作成されました。 淋菌 そして 髄膜炎菌. しかしながら、その特徴のために、それは抗生物質に対する感受性の研究に理想的であり、信頼でき再現可能な結果を​​提供することがわかった。.

このため、MüellerHinton寒天培地は、Kirbyディスク拡散法による抗菌剤感受性試験の実施のために、臨床検査規格協会（CLSI）および欧州抗菌剤感受性試験委員会によって承認された培地である。バウアー.

索引

  • 1財団
  • 2準備
  • 3つの用途
    • 3.1抗菌技術
    • 3.2MüellerHinton寒天培地へのディスクの戦略的配置
  • 4誤った結果の原因
  • 5制限
  • 6品質管理
  • 7参考文献

財団

それは非選択的な栄養培地であるため、それはほとんどの病原菌の増殖に優れています.

一方、その単純な組成は物質をその上に容易に拡散させるので、ディスク拡散法による感受性試験にとって本質的な特徴である。.

その特徴のもう一つは、それがスルホンアミド、トリメトプリムとテトラサイクリンを効果的に評価することを可能にする少量の抑制剤を含むということです。.

ただし、以下のような適切な機能を保証するためには、培地が一定の条件を満たさなければならないことに留意する必要があります。

PH調整、寒天の深さおよび適切な濃度のチミン、チミジン、Ca++, Mg++ とZn++.

方法論が標準化されているので、次のようなすべてのパラメーターを満たす必要があることも知っておく必要があります。

接種材料の濃度、抗生物質ディスクの濃度および保存、寒天上の適切な数のディスクの配置、ディスク間の距離、特定の抗生物質の戦略的配置、雰囲気、温度および時間インキュベーション.

準備

脱水ミュラーヒントン培地37グラムを量り、1リットルの蒸留水に溶かす。それを溶解するのを助けるためにかき混ぜながら媒体を加熱する。 1分間煮ましょう.

オートクレーブを取り、121℃で15分間殺菌します。オートクレーブから取り出すときは、フィオラを50℃のウォーターバスに入れて冷却します。直径10 cmの滅菌ペトリ皿に25から30 mlを注ぐ.

プレートの厚さは平均4 mm（理想）で、3〜5 mmの範囲が許容されます。.

MüellerHinton寒天ベースを使用して血液寒天を調製することが望ましい場合は、プレートに供する前に5％滅菌脱繊維子羊の血液を注ぐ。.

培地の最終pHは7.2から7.4の間でなければなりません.

使用するまで、冷蔵庫に投資して保管してください。使用前にプレートを室温にする.

調製した培地の色はライトベージュです。.

用途

それはほとんどの急速に成長していない病原体に対するアンチビオグラムまたは抗生物質感受性テストを実行するために使用されます.

寒天に血液が補充されている場合は、次のような要求の厳しい微生物のアンチビオグラムを実行するのに役立ちます。 肺炎球菌, ヘモフィルス種、髄膜炎菌, とりわけ。それはまた隔離するのに使用されていました レジオネラ・ニューモフィラ.

アンチバイオグラム法

アンチビオグラムを実行する前に、1.5 x 10に相当するバクテリア溶液を調製しなければなりません8 細胞.

これを行うために、３〜４個のコロニーを純粋培養物から取り出し、そしてトリプチカーゼソイブロスまたはミューラーヒントンブロス中に懸濁し、２〜６時間インキュベートし、そして濃度を無菌食塩水で調整し、それをマックファーランド標準と比較する。 0.5％.

それらが微生物を要求している場合、コロニーはそれらがマックファーランドの０．５％の濃度に達するまで直接懸濁することができる。続いて、ミューラーヒントンプレートに、調製した細菌溶液を染み込ませた綿棒を播種する。.

これを行うには、綿棒を溶液に浸してから、チューブの壁を押して余分な液体を取り除きます。綿棒を表面全体に通過させた直後に、手を触れていない部位が残らないようにしてから、プレートをわずかに回転させて再び播種する。操作はあと2回繰り返されます.

10分間放置した後、抗生物質ディスクを滅菌ピンセットで24 mmの間隔をあけて置きます。寒天上に各ディスクを配置した後、彼らはよく接着されていることを確認するためにクランプでそれぞれを軽く押す.

このプロセスの後、プレートをひっくり返し、エアロビオシス中で35〜37℃で16〜18時間インキュベートする。それが要求の厳しい微生物であるなら、それは微好気球菌症を必要とするかもしれません、そして、抗生物質がオキサシリンディスクを含むならば、それは24時間で読まれるべきです.

定規は、各ハローの直径を測定するために使用されます。結果はmmで記録する必要があります。続いて、得られた値は、現在のＣＬＳＩマニュアルによって公表されているカットポイントの表と相関している。.

場合によっては、敏感（S）、中間（I）、または耐性（R）として報告する。.

抗生物質は、分離された微生物と発生している感染の種類に従って選択されます。.

時々抗生物質の戦略的配置は表現型耐性パターンを示すと考えるべきである.

MüellerHinton寒天培地へのディスクの戦略的配置

腸内細菌の場合、クラブラン酸ディスクは第3世代と第4世代のセファロスポリンの前に置かなければなりません。卵形の広がりは、この株が広域スペクトルβ-ラクタマーゼ（ESBL）の生産者であることを示しています。これは患者がいかなるセファロスポリンでも治療されるべきでないことを意味します.

ブドウ球菌では、エリスロマイシンまたはアジスロマイシンディスクをクリンダマイシンディスクの前に置くことが重要です（D検定）.

エリスロマイシンにおける耐性ハローおよびクリンダマイシンハロにおける平坦化は、その株がクリンダマイシン株（ＲＩＣ）に対して誘導性の耐性を有することを示す。これは、クリンダマイシンによる治療が効果的ではないことを意味します.

腸内細菌科およびいくつかの非発酵グラム陰性桿菌における誘導性ＡＭＰ Ｃ株の検索のために、２７ｍｍの距離で、セフタジジム、セフォキシチンまたはピペラシリンタゾバクタンのディスクをイミペネムディスクと対面させる。.

イミペネムに面している円板の1つで平らになったハローは、誘導性AMP Cの存在を示します.

構成的ＡＭＰ Ｃの検索のために、クロキサシリン５００μｇディスクを２５ｍｍの距離で、セフタジジム（３０μｇ）およびセフォタキシム（３０μｇ）と対面させる。セファロスポリンの1つの広いハローは陽性を示す.

クロキサシリンディスクは、１８ｍｍの距離でフェニルボロン酸（４００μｇ）を含浸させたＷｈａｔｍａｎ Ｎｏ．６濾紙の９ｍｍディスクと交換することもできる。それは前のものと同じように解釈されます.

最後に、特にメタロ - ベータ - ラクタマーゼの産生を調査すること。 緑膿菌, イミペネムディスクおよびメロペネムディスクに面する、１０μｌのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ ７５０μｇ）およびチオグリコール酸（ＳＭＡ ３００μｇ）を含浸させたディスクを１５ｍｍの距離で使用する。.

イミペネムまたはメロペネムハローがEDTA / SMAディスクに向かって広がっている場合、テストは肯定的です。この結果は修正Hodge検定によって確認されなければならない.

この方法は、の株を接種することからなる。 大腸菌 MüellerHintonプレート上のATCC 25922。イミペネムディスクをプレートの中央に置き、それからフルートをディスクから周囲に向かってのひずみで作る。 緑膿菌 疑わしいあなたはプレートあたり4つまでのひずみをテストすることができます.

脈理の周囲にイミペネムハローの歪みゾーンがある場合、試験は陽性となる。.

誤った結果の原因

-あまり保存されていない抗生物質のディスクは誤った耐性を生み出す可能性があります。例えば、オキサシリンディスクは温度変化に対して非常に弱いです。.

-示された（酸）よりも低い培地のpHは、アミノグリコシドおよびマクロライドにおいてより小さなハロー（偽耐性の危険性）、およびペニシリン、テトラサイクリンおよびノボビオシンにおいてより大きなハロー（偽感受性の危険性）を生じる。.

-ｐＨが指示された（アルカリ性）以上であれば、上記の効果は逆転する。.

-高チミンおよびチミジン濃度の培地はスルホンアミドおよびトリメトプリムの阻害ハロを著しく減少させることに影響する.

-高濃度のカルシウムとマグネシウムは、アミノグリコシド、ポリミキシンBおよびテトラサイクリンの株に対する偽耐性を生じる。 緑膿菌.

-カルシウムとマグネシウムの濃度が低いと、アミノグリコシド、ポリミキシンB、およびテトラサイクリンの株に対して偽感受性を生じる。 緑膿菌.

-亜鉛の存在はカルバペネムディスク（イミペネム、メロペネムおよびエルタペネム）の結果に影響を与えます.

-３ｍｍ未満の媒体の厚さは誤った感度結果を生じるが、５を超える厚さは偽の抵抗を生じるであろう。.

-抗生物質の排出は即時であるため、抗生物質図の椎間板の動員は変形したハローを与える.

- 寒天では均一なまたは密集した増殖がないため、非常に弱い接種材料が結果に影響を与えます。これは、ハローが通常よりも大きくなる可能性があるという事実に加えて、阻害ゾーンを測定するための必要条件です。.

-接種量が多すぎると、ハローが通常よりも小さくなる可能性があります。.

-ディスク間の距離を尊重しないと、1つのハローが別のハローと重なり、正しく読み取ることができません。.

-COとインキュベートする2 テトラサイクリンとメチシリンディスクのハローのサ​​イズを大きくする.

-35℃以下の温度でインキュベートするとより大きなハローが生成されます.

-血液の添加はスルホンアミドのハロサイズを減少させる.

制限

抗菌薬による抗生物質の感受性in vitro）それが動作することを保証するものではありません 生体内.

品質管理

培地に適切な量のチミンが含まれているかどうかを知るためには、株を蒔く エンテロコッカス・フェカリス ATCC 29212とトリメトプリムスルファメトキサゾール（SXT）への感受性をテストする、それは満足のいくように20以上のハローを与える必要があります.

参考文献

  1. "AgarMüller-Hinton" ウィキペディア、フリー百科事典. 2018年11月16日、12：23 UTC。 2019年1月27日、04時22分
  2. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  3. 寒天拡散試験による良好な感受性研究のためのCona E.条件. Rev Chil Infect, 2002年; 19（2）：77-81
  4. ディフコフランシスコソリアメルギゾ研究所。 5％ヒツジ血を含むMüellerHinton寒天。 2009年に入手可能：http://f-soria.es
  5. BDミューラーヒントンII寒天研究所。 2017で入手可能：.bd.com
  6. 研究所ブリタニア。ミュラーヒントン寒天培地。 2015年に入手可能：britanialab.com
  7. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断第5版社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas型AmpC：表現型検出のための一般および方法. Soc。Ven。 Microbiol. 2009年２９（２）：７８−８３。 scielo.orgから入手できます。.
  9. Perozo A、Castellano M、Ling E、Arraiz N.の臨床分離株におけるメタロベタラクタマーゼの表現型検出 緑膿菌. カスメラ, 2012年; ４０（２）：１１３−１２１に記載されている。 scielo.orgから入手できます。.