パパデキストロースの基礎、調製および使用



の パパデキストロース寒天 それは固体の、非選択的な栄養価の高い培地です。それは細菌種および真菌種を成長させることができるが、その使用は特に糸状菌および酵母の単離のために示される。それはまた英語の表現Potato Dextrose AgarによってPDA培地として知られています.

それは植物病原性真菌、すなわち植物に影響を与えるものの単離に特に有用である。感染した植物からサンプルを植えるために、サブロー寒天培地またはマルタ寒天培地のような他の培地を使用することができるが、日常的な使用のためには、より大きな胞子形成のためにポテトデキストロース寒天培地が好ましい。.

化粧品、医薬品、乳製品のサンプル中の真菌コロニーのカウントにも使用されます。同様に、この培地中で非常によく成長し、それらの特徴的な色素を発達させる皮膚糸状菌を探して皮膚掻爬のサンプルを植えることは有益である。.

ポテトデキストロース培地は、実験室で調製するのが非常に簡単で簡単です。それは名前が示すように、ジャガイモ注入、ブドウ糖および寒天を含んでいます。バクテリアの成長を防ぎ、真菌種に対する選択性を高めるために、追加の抑制物質を加えることができます。.

索引

  • 1財団
  • 2準備
    • 2.1 - パパデキストロース寒天の自家製（非市販）調製
    • 2.2 - パパデキストロース寒天の市販品
  • 3つの用途
    • 3.1ジャガイモデキストロース寒天上に植物サンプルを植えるためのプロセス
    • 3.2パパデキストロース寒天上に皮膚、髪の毛または爪の鱗片のサンプルを植えるためのプロセス
    • 3.3識別手順
    • 3.4コロニー数
    • 3.5菌株のメンテナンス
  • 4品質管理
  • 5参考文献

財団

パパデキストロース寒天培地は、糸状菌および酵母の発生に必要な栄養素を提供する培地です。.

グルコースとポテトの注入の組み合わせは、真菌の満足のいく成長のための完全なエネルギー源を提供します。寒天は環境に安定性を提供するものですが.

培地単独では細菌の増殖を阻害しないので、それは非選択的培地である。選択的にするためには酒石酸や抗生物質などの抑制物質を加える必要があります.

準備

-ポテトデキストロース寒天の自家製（非市販）調製

ペトリ皿

これは次のようにして準備されます。

まず第一に、じゃがいもは非常によく洗われて、彼らが持っている汚れを取り除きます。それらはすべてと殻で薄いスライスに切られます。じゃがいも２００ｇを秤量し、１リットルの蒸留水で３０分間煮沸する。.

時間が濾過された後またはガーゼを通してすべての調製物をこすった後.

得られた液体は、それが１リットルに達するまで蒸留水で完成する。この注入液に、２０ｇの寒天 - 寒天および２０ｇのデキストロースを添加し、よく混合しそして１５ポンドの圧力で１５分間１２１℃でオートクレーブにかける。.

50℃に冷却し、滅菌ペトリ皿に入れる。調製したプレートは冷蔵庫に保存されています.

くさび

パパデキストロース寒天ウェッジも用意できます。.

この場合、オートクレーブ中で滅菌する前に、１２〜１５ｍｌの培地をチューブに入れ、次いでそれらをオートクレーブにかけ、固化するまでそれらを特別な支持体上に置く。冷蔵庫に保存する.

培地のpHは5.6±0.2のままですが、一部の検査室ではバクテリアの増殖を抑えるために10％酒石酸を添加してpHを3.1±0.1に下げています.

これと同じ意味で、他の研究室では抗生物質を添加して真菌の培養に選択的にし、細菌の発生を防ぐことを好む.

-ポテトデキストロース寒天の市販品

市販の脱水媒体39 gを量り、蒸留水1リットルに溶かします。 5分間そのままにしておく.

混合物は、完全に溶解するまで頻繁に撹拌することによって加熱される。続いてオートクレーブ中、121℃で15分間滅菌した。.

プレートまたはウェッジを用意することができます。上記のように進めます.

ｐＨは５．６±０．２のままである。 3.1のpHが望ましい場合は、プレートに供する前に14mlの20％滅菌酒石酸を添加すべきである。.

準備されていない培地の色はベージュ色で、淡い琥珀色で、やや曇りや乳白色の外観をしています。.

用途

ジャガイモデキストロース寒天に植物サンプルを植える方法

-シミのある葉用

葉はバラバラに.

50％アルコールを入れた50ccのグラスの中に、20〜30秒間表面を消毒するために、葉のかけら（汚れた部分と健康的な部分）を置きます。薄い葉の場合はアルコールを引き、40〜50秒間20％次亜塩素酸ナトリウムを添加し、それが樹皮や丸太の場合は80秒に時間を増やす.

次亜塩素酸ナトリウムを引き、消毒した断片を滅菌したクリップで取り、それらを培地の表面に置いてください（最大10個）。日付を入れて20から30℃でインキュベートする.

-果物や塊茎のために

果実が肉質の場合は、真菌の影響を受けた果実を開き、病気の部分と健康な部分の両方を滅菌メスで細かく刻み、寒天の表面に置きます。.

果物がレモンやオレンジのような柑橘類であるならば、あなたは種を開けて蒔くべきです.

果物の表面が影響を受けて胞子が観察される場合は、プレート上ですりおろした方法を使用するのが最善です。これは、滅菌して冷却した「L」の形のへらで胞子に触れることからなり、その後寒天上に2〜3回ジグザグ播種を行う。.

-穀物用

それらは葉に記述されているように消毒されそれから寒天の上に置かれる.

-枝や茎に

樹皮の掻き取りが行われ、その後、健康な部分と病気にかかった部分の断片が取り出され、寒天上に直接播種される。.

播種したプレートをエアロビオシス中、20〜30℃で72時間インキュベートする。.

パパデキストロース寒天上に皮膚、髪の毛または爪の鱗屑のサンプルを植える方法

サンプルは、皮膚糸状菌を探して罹患した毛髪、皮膚の薄片、または爪を切るために、メスの刃11番を使用して採取しなければならない。サンプルを採取する前に、70％アルコールで消毒してください。.

-皮膚サンプル

鱗片状の病変では、真菌を見つける可能性が高いため、病変の端を削り取る必要があります。.

滲出性病変では、サンプルは乾いたまたは湿った綿棒で採取されます。ジャガイモデキストロース寒天またはサブロー寒天に直ちに播種する。輸送手段を避ける.

サンプリングの別の方法は、MariatとAdan Camposのカーペットスクエアテクニックによるものです。この場合、患部をさらに培養するために滅菌ウールで5回擦ります。.

サンプルは培地に直接入れることができます.

-髪のサンプル

病理によっては、患部は根によって切り取られたり引き裂かれたりすることがあります。サンプルを培地に入れる.

-爪サンプル

あなたは罹患した爪の特定の部分を削り取るか切断することができます。怪我の種類によって異なります.

菌と培養液が接触する可能性を高めるために、播種前にサンプルを1 mmの大きさに切ってください。.

確認手順

プレートで得られたコロニーをポテトデキストロース寒天を含む試験管中で単離して、コロニーの肉眼的研究（外観、色、粘稠度、発育度）を行う。.

顕微鏡的研究（構造およびそれらの形成の観察）は、薄層とラメラの間の顕微鏡下での微量培養または直接観察によって行うことができる。.

コロニー数

この培地は、植物サンプル、食品、化粧品または薬品中に存在する真菌および酵母菌の量を測定するためにも使用できます。この目的のために、抗生物質を添加したパパデキストロース寒天が使用され、例えば：（クロラムフェニコール、クロロテトラサイクリンまたは両方）.

1 mlのサンプル（できれば希釈したもの）を滅菌した空のシャーレに注ぎ、ポテトデキストロース寒天プラグを溶かして45℃に冷まします。シャーレに注ぎ、均質化するまで回転させます。凝固するまで静置してください。.

探している菌の種類とサンプルの種類に応じて、5〜7日以上、20〜25℃（カビ）または30〜32℃（酵母）で好気的にインキュベートします。 2枚のプレートは両方の温度範囲でインキュベートするために使用することができます.

真菌株のメンテナンス

パパデキストロース寒天は、数年間生存可能な真菌株を維持するために使用することができます.

これを行うには、真菌をパパデキストロース寒天ウェッジで栽培し、一旦真菌が増殖すると、それは鉱油で覆われる。オイルはオートクレーブ内で45分間滅菌する必要があり、粘度は300〜330 Sayboltです。オイルはベベル先端を1〜2 cm超える必要があります。.

品質管理

調製した各バッチから1枚または2枚のプレートを取り出し、25℃で48時間または20℃で96時間インキュベートします。優れた無菌管理はコロニーの発生がないものです.

以下のような、既知または認証されたコントロール系統

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, カンジダ・アルビカンス ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, 白癬菌 ATCC9533。すべての場合において、良好な成長が見込まれる.

参考文献

  1. 研究所ブリタニア。パパグルコサード寒天。 2015年に入手可能：britanialab.com
  2. ネオゲン研究所ジャガイモデキストロース寒天。 Foodafety.neogen.comで入手可能です。
  3. インスモラボ研究所ジャガイモデキストロース寒天。 insumolab.clで入手可能
  4. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  5. カサス - リンコンG.一般真菌学。 1994.第2版中央デベネズエラ大学図書館版。カラカス、ベネズエラ.
  6. Aceituno M. Pharmacopeia Usp Reference Method 2005に準拠した、アイシャドウのコンパクトパウダータイプのナショナルプロダクションラボにおける微生物学的品質の評価。サンカルロスデグアテマラ大学.
  7. クエタラM。表面サンプルの処理。イベロアメリカ真菌学誌。 2007年pp。 1〜12