寒天サブローの基礎、準備および使用



の サブロー寒天培地, サブローデキストロース寒天としても知られている、それは特に酵母、カビおよび皮膚糸状菌のような真菌の単離および発生のために濃縮された固体培地である。.

したがって、臨床的または非臨床的サンプルのいずれかから、病原菌または日和見真菌の存在を調査するための微生物学実験室では、この手段を欠くことはできない。同様に、StreptomycesやNocardiaなどの糸状菌の増殖にも理想的です。その使用は非常に広いです、それは人間、動物、植物そして産業の真菌学で使用することができます.

この媒体は、主に皮膚藻類に起因する頭皮の疾患の世界的に有名な専門家となった有名な皮膚科医Raimond Sabouraudによって1896年に作成されました。.

その作成はそれ以来ずっと使われてきたので重要で、今日も続けられています。.

これは真菌にとって特殊であるが、この培地では細菌が増殖する可能性があるので、混合フローラを有するサンプルについてはそれらの調製に抗生物質を含める必要があり、したがって存在し得る細菌フローラの増殖を抑制する。.

抗生物質の選択は注意深くそしてあなたが回復したい真菌の種類を考慮してなされるべきです。.

索引

  • 1財団
    • 1.1 Sabouraudブドウ糖寒天と抗生物質の最もよく使われる組み合わせ
  • 2準備
    • 2.1ブドウ糖サブロー寒天培地 
    • 2.2サブローデキストロース寒天培地（エモンの改変）
    • クロラムフェニコールを含むサブローデキストロース寒天培地（エモンズの変法）
    • 2.4シクロヘキシミドを含む2.4ブドウ糖サブローエモン寒天培地
    • 2.5デキストロースサブロー寒天培地（エモンズ）とクロラムフェニコールおよびシクロヘキシミド
    • 2.6追加できる他の抗生物質
  • 3特別な考慮事項
  • 4品質管理
  • 5つの用途
    • 5.1一次栽培
    • 5.2胞子形成
    • 5.3保存
    • 5.4マイクロカルチャー
    • 5.5人間の真菌学において
    • 5.6動物真菌学
    • 5.7環境菌学
    • 5.8産業菌学
    • 5.9植物菌学
  • 6参考文献

財団

サブローデキストロース寒天培地は、その元の製剤では5.6±0.2の酸性pHのために選択性が弱い培地ですが、主に長期間のインキュベーションではまだ細菌が発生する可能性があります.

培地はカゼインペプトンと膵臓で消化された動物組織を含み、微生物の発生のための炭素源と窒素源を提供します。.

それはまた高濃度のグルコースを含み、それはエネルギー源として働き、バクテリアよりも真菌の増殖を促進する。すべて寒天と混ぜ合わせます。これは正しいコンシステンシーを提供する成分です。.

一方、抗生物質が添加されている場合、サブローデキストロース寒天は選択的かもしれません.

抗生物質と一緒にそれは傷のサンプル、開いた潰瘍または大きい細菌汚染が疑われるあらゆるサンプルで特に有用です.

Sabouraudブドウ糖寒天と抗生物質の最もよく使われる組み合わせ

-クロラムフェニコールを含むサブロー寒天培地：酵母および糸状菌の回収に最適.

-ゲンタマイシンとクロラムフェニコールを含むサブロー寒天培地：この培地では、ほぼすべての糸状菌と酵母が増殖し、腸内細菌、シュードモナス、スタフィロコッカスを含む多数の細菌を抑制します。.

-シクロヘキシミドを含むサブロー寒天培地：疑いが二型性真菌である限り、皮膚または気道からのサンプルに特に有用です。.

シクロヘキシミドは慎重に使用する必要があります。サンプル中に汚染物質として存在する可能性のある非病原性または環境性の真菌および酵母の増殖を抑制するために使用されますが、それはまたいくつかの真菌の増殖を抑制します。 クリプトコッカスネオフォルマンス,  Aspergillus fumigatus、Allescheria boydii、Penicillium spおよび その他の日和見菌.

-クロラムフェニコール＋シクロヘキシミドを含むサブロー寒天培地：主に二形性皮膚糸状菌および真菌を単離するために使用される。それはそれがとして日和見真菌のいくつかの種を阻害するという欠点があります。 カンジダのアルビカンス, Aspergillus、ZygomycetesまたはC. ネオフォルマンス.

-クロラムフェニコール、ストレプトマイシン、ペニシリンG、およびシクロヘキシミドを含むサブロー寒天培地：細菌や腐生性真菌に非常に汚染されているサンプルには理想的ですが、増殖が阻害されるという欠点があります。 放線菌とノカルジア, 上記の日和見キノコに加えて.

準備

あなたが別々に成分を持っているならば、あなたは以下の方法でそれを準備することができます：

デキストロース寒天サブロー 

重さ：

- 40グラムブドウ糖

- ペプトン10g

- 寒天15グラム

- 蒸留水1000mlを量る

全ての成分を混合し、ｐＨを５．６に調整する。溶質を沸騰させて溶解させ、25 x 150 mmのチューブに20 mlの培地を、フランジなしで、好ましくはコットントップ付きで分配する.

空室状況に応じて、他のチューブサイズも使用できます。.

それらを圧力雰囲気（１２１℃）で１０分間オートクレーブする。オートクレーブ処理時間を超えないでください。オートクレーブを出るとき、それらがフルートのピークに固まるまでチューブを支持体で傾ける。.

別の方法は、それが沸騰するまで加熱することによって成分を溶解することです。同じオートクレーブフィオラに10分間入れた後、ペトリ皿に20 mlを入れる.

Sabouraudブドウ糖寒天培地が利用可能であるならば、それはすでにすべての成分を含んでいます、我々は水１リットルのために商業家によって指定された量を量りに進みます。残りのステップは上記のものと同じである。.

デキストロース寒天サブロー（エモンズの変質）

重さ：

-  20グラムブドウ糖

- ペプトン10g

-  寒天17グラム

-  蒸留水1000mlを量る

全ての成分を混合し、ｐＨを６．９に調整する。前の場合と同じ方法で進めます.

すべての成分を含む培地を提供する商業住宅があります。この場合、インサートに記載されているように計量して準備します。.

クロラムフェニコールを含むサブローデキストロース寒天培地（Emmonsの改良版）

クロラムフェニコールストック溶液

- クロラムフェニコール塩基500 mg

- 95％エタノール100mlを量る

- ミックス

サブローデキストロース寒天培地（Ｅｍｍｏｎｓ）を上記のように調製し、さらに、培地１リットルごとに、オートクレーブ処理の前に１０ｍｌのクロラムフェニコールストック溶液を添加する。.

シクロヘキシミド含有ブドウ糖寒天サブローエモンズ

シクロヘキシミドストック溶液

- シクロヘキシミド5グラムを量ります

- アセトン100ml

- ミックス

サブローデキストロース寒天培地（Ｅｍｍｏｎｓ）を既に記載したように調製し、さらに培地１リットルごとにオートクレーブ処理する前にシクロヘキシミド原液１０ｍｌを添加する。.

クロラムフェニコールとシクロヘキシミドを含むサブローデキストロース寒天培地（Emmons）

サブローデキストロース寒天培地（Ｅｍｍｏｎｓ）を上記のように調製し、さらに培地１リットルごとに、オートクレーブ処理の前に１０ｍｌのクロラムフェニコールストック溶液および１０ｍｌのシクロヘキシミドストック溶液を加える。.

加えることができる他の抗生物質

培地1リットルあたり20,000〜60,000単位のペニシリン.

培地1リットルあたり30 mgのストレプトマイシン.

両方とも、わずかに冷却した（50〜55℃）培地をオートクレーブ処理した後に組み込む必要があります。.

培地1リットル当たりネオマイシン0.04 g.

培地1リットルあたりゲンタマイシン0.04 g.

特別な考慮事項

安全のために、胞子の分散および吸入を避けるために、ペブル皿よりもくさび型チューブ（フルートピークで傾斜した）中にサブローデキストロース寒天を植えることが好ましい。.

半無好気性条件がいくつかの株では胞子の形成を阻害することが示されているので、サブロー寒天培地を含む管はスクリューキャップではなく綿で覆うことが重要である。 Coccidioides immitis. さらに、ほとんどの真菌は好気性です.

スクリューキャップを使用する場合は、しっかりと閉めないでください。.

品質管理

準備されたメディアは、それらの適切な機能を検証するための品質管理が必要です。この目的のために、特定の対照株が播種されている。.

クロラムフェニコールを含むサブローデキストロース寒天の場合、ＡＴＣＣ株を使用することができる。 カンジダ・アルビカンス, これは優れた成長を遂げているはずです。もう一方のプレートには株が接種されています 大腸菌, 完全に禁止されている必要があります.

接種されていないプレートは、微生物が増殖してはならない場所でインキュベートされます。.

クロラムフェニコールとシクロヘキシミドを含むサブローデキストロース寒天は、  白癬菌, よく発達しなければならない。他のプレートには、以下の株が接種されています。 Aspergillus flavus, 成長がほとんどないか、または成長がないはずです。さらに、接種されていないプレートを無菌状態にするためにインキュベートする.

シクロヘキシミドを含むサブローデキストロース寒天培地の場合、 カンジダ・アルビカンス, 白癬菌  ○ Microsporum canis, これは良い成長を示すはずです.

同様に、 Aspergillus flavus, わずかな成長または成長なしを示す。最後に無菌管理のために接種していないプレートをインキュベートする.

用途

一次栽培

古典的なサブローデキストロース寒天は4グラムのデキストロースを含み、それは各真菌の特徴的な形態を示すので、一次単離媒体として優れています.

顔料の生産を実証することも優れています。しかし、胞子形成を観察するのは最も適切な手段ではありません.

成長することもお勧めできません Blastomyces dermatitidis, 高濃度のグルコースが存在するために抑制されます。.

その一方で、栽培のために一定の考慮事項に留意する必要があります.

カビのように室温でよりよく発達する真菌もあれば、酵母のように37℃でうまく成長するものもあれば、両方の温度で発達するものもあります（二形性真菌）。.

このため、1枚のプレートを室温で、もう1枚のプレートを37℃でインキュベートするために、同じサンプルに複数のSabouraud寒天プレートを使用する必要がある場合があります。.

例えば, Sporothrix schenckii それは2枚の皿に蒔かれています。一方を室温でインキュベートしてカビ相を得、他方を３７℃でインキュベートして酵母様相を得るが、後者では培地に５％の血液を添加する必要がある。.

他の場合には、菌細胞腫のサンプルのように、1枚はクロラムフェニコール、もう1枚はシクロヘキシミドを含む2枚のサブロー寒天培地を播種します。 1つ目は真菌由来の真菌細胞腫（Eumicetoma）の原因物質、および放線菌細胞腫などの細菌由来の真菌細胞腫の2番目の原因物質の増殖を可能にします。.

胞子形成

Emmonsによって変更されるブドウ糖Sabouraud寒天は2グラムのブドウ糖を含み、単離だけでなく菌の胞子形成と保存にも使用されます。.

この培地では、 Blastomyces dermatitidis.

保全

真菌培養物を保存するために冷蔵庫（2〜8℃）に保存することができます。保管期間は2〜8週間です。この時間の後、彼らはプロセスを繰り返すために継代培養されなければならない.

真菌の中には、室温で最もよく維持されるものがあります。 表皮ブドウ球菌、Trichophyton schoenleinnii、T。violaceum そして Microsporum audounii.

ブドウ糖が寒天から完全に除去され、そして乾燥を避けるために培地中の寒天の量が減らされるならば、株の維持は多形性を避けるために長くすることができる。.

マイクロカルチャー

いくつかの糸状菌の同定のためには、サブロー寒天培地または性的および無性生殖の構造を観察するための他の特別な手段を用いて微量培養を行うことが必要である。.

人間の真菌学では

それは主に真菌性疾患、特に皮膚とその付着物（髪の毛と爪）に影響を与えるものの診断に使用されます。.

試料は、分泌物、滲出液、皮膚、髪の毛、爪、痰、CSFまたは尿であり得る。一般的に分離されている病原体は、皮膚糸状菌、皮下および全身性真菌感染症を引き起こす真菌です。.

動物菌学

動物は真菌感染症の影響を受けることが多いので、サブロー寒天培地はヒトの真菌学と同様に動物にも有用です。.

例えば、皮膚糸状菌はしばしば動物に影響を及ぼします。そのような場合 Microsporum canis var distortum, それは頻繁に犬、猫、馬、豚およびサルに感染する。同様に, Microsporum gypseum 犬、猫、牛に感染する.

鶏、鶏、鶏などの鳥は Microsporum gallinae.

他のキノコ、のように Zymonema farciminosum, それらはまた動物、主にウマ、ラバおよびロバの病気の原因でもあり、リンパ管に重要な炎症を引き起こします。.

Sporothrix schenkiiとHistoplasma capsulatum 家畜や人間の動物に影響を与える.

環境菌学

特定の環境、特に手術室や集中治療室（ICU）の診療所や病院では、多くの病原性または日和見性真菌がいつでも集中することがあります。したがって、それらを制御する必要があります.

その他の脆弱な場所は、環境真菌の集中の影響を受ける可能性のある図書館や古い建物です。.

環境研究では、サブローデキストロース寒天培地が真菌の分離に使用されます。.

産業菌学

サブローデキストロース寒天は、とりわけ、化粧品、食品、飲料、皮革、繊維製品の製造における真菌汚染物質の研究に欠けてはいけません.

植物菌学

植物はまた、真菌によって引き起こされる病気にも罹り、植物の様々な部分に影響を及ぼし、それが収穫を終わらせることさえあり、農業に大きな損失をもたらす.

参考文献

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  3. Navarro O.（2013）獣医学の真菌学国立農学大学。ニカラグア.
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