尿素ブロスの基礎、調製および使用



の 尿素ブロス 特定の微生物における酵素ウレアーゼの存在を実証するために使用される液体培地です。ウレアーゼは構成的に生産される微生物の酵素であり、すなわち、それが作用する基質が存在するかどうかとは無関係に合成される.

ウレアーゼの機能は有機化合物の分解に関係しています。すべての微生物がこの酵素を合成することができるわけではないので、実験室でのその決定は、特定の細菌株を同定し、さらに同じ属の種を区別することさえ可能にする。.

尿素テストには2種類あります。スチュアートとクリステンセンです。それらはそれらの組成および感度において異なる。最初のものは、プロテウス属の種によって産生される大量のウレアーゼを示すのに特別なものです.

2つ目はより高感度で、クレブシエラ属、エンテロバクター属、ブドウ球菌属、ブルセラ属、ボルデテラ属、バチルス属、ミクロコッカス属、ヘリコバクター属およびマイコバクテリウム属のような他の細菌属によって後期に生成される少量のウレアーゼを検出することができる.

Stuart尿素ブロスは、尿素、塩化ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、酵母エキス、フェノールレッド、蒸留水で構成されています。.

クリステンセンブロスまたは寒天尿素はペプトン、塩化ナトリウム、リン酸一カリウム、グルコース、尿素、フェノールレッド、蒸留水および寒天からなる。後者はそれが固体媒体である場合のみ.

索引

  • 1財団
    • 1.1 Stuart尿素ブロス
    • 1.2クリステンセンブロスまたは寒天尿素
    • 1.3両方のメディアの解釈（スチュアートとクリステンセン）
  • 2準備
    • 2.1 Stuart尿素ブロス
    • 2.2クリステンセンブロスまたは寒天尿素
  • 3つの用途
  • 4尿素試験の播種
  • 5品質管理
  • 6参考文献

財団

酵素ウレアーゼは尿素を加水分解して二酸化炭素、水および２分子のアンモニアを形成する。これらの化合物は反応して炭酸アンモニウムと呼ばれる最終生成物を形成する.

スチュアート尿素ブロス

スチュアート尿素ブロスは、ｐＨ６．８でより緩衝化されている。それ故、微生物は大量のアンモニウムを生成して赤色をフェノールに変えることができなければならない。 pHは8以上にならなければなりません.

それゆえ、スチュアート尿素ブロスは、プロテウス種に対して選択的であり、24〜48時間のインキュベーションでポジティブな結果をもたらし、そして少量のウレアーゼを生成するかまたはゆっくりと尿素を加水分解する細菌には効果的ではない。.

これは、プロテウス種が窒素源として尿素を使用できるからです。対照的に、他のウレアーゼ産生細菌は追加の供給源を必要とする.

しかしながら、Pérez等。 （2002）Stuart尿素ブロスがChristensenからの尿素寒天と同じくらい効率的であると決定して、Candida、Cryptococcus、Rhodotorula、Trichosporon及びSaccharomycesの酵母株におけるウレアーゼを決定しました。.

この研究の著者らは、24時間と48時間インキュベートすることによって、両方のメディア（StuartとChristensen）と100％の一致を達成したと主張している。メディアを強いピンク色のフクシア色に変えることができたことを彼らが肯定的に受け止めたという条件を作る.

Lodder（1970）が、ほとんどすべての酵母菌がChristensenの尿素寒天培地の斜角を淡いピンク色にすることができることを確認したので、この説明は必要である。これは、それらが尿素を最小量で加水分解することができ、そして表面上のアミノ酸の酸化的脱カルボキシル化によってアミンを形成することができるからである。これは肯定的に解釈されるべきではありません.

Christensenのスープまたは尿素寒天

Christensen尿素ブロスまたは寒天は緩衝性が低く、少量のアンモニウムを検出できます。さらに、この培地はペプトンとグルコースが豊富です。これらの化合物は、スチュアートブロス中で増殖しない他のウレアーゼ産生微生物を発生させる。.

同様に、Christensenの尿素テストは、特にProteusに対してより速い結果を提供し、最短30分、最長6時間で強い陽性を示します。.

残りのウレアーゼ産生微生物は、わずか6時間後、そして24、48、72時間以上後に強く培地の色を変えることに成功し、そしていくつかの株でさえ5または6日後に弱い反応を与えることができます。.

両方のメディアの解釈（スチュアートとクリステンセン）

培地はもともと黄色 - 橙色であり、陽性反応は培地の色をピンク - フクシアに変えるであろう。色の強度は、生成されたアンモニウムの量に正比例します.

否定的な反応はChristensenの尿素の寒天と淡いピンクを与えることができるイーストを除いて元の色の媒体を残す.

準備

スチュアート尿素ブロス

商業住宅の指示に従って必要なグラムを量ります。できれば滅菌蒸留水に溶かします。尿素は熱に弱いので、溶かすために熱を使わないでください.

膜濾過法を用いて滅菌する。このために、直径０．４５μの孔を有するミリポアフィルターを使用する。オートクレーブを使用しないでください。溶液を濾過したら、それを滅菌チューブに分配する。信頼できる結果を得るために、それはチューブ当たり最小量として１．５ｍｌから最大量として３ｍｌの間で移されなければならない。.

使用前に冷蔵庫とかんしゃくで保存する.

ろ過方法が利用できない場合は、信頼性の高い結果を得るために直ちに培地を使用する必要があります。.

尿素スチュアートブロスを調製する別の方法は以下の通りである。

尿素を含まない、いくつかの商業住宅は尿素テストのための半分の基盤を販売します.

商業住宅で示された金額を量ります。それを蒸留水に溶解し、そしてオートクレーブ中で121℃で15分間滅菌する。少し休ませて、培地が暖かくなったら、20％に調製し、濾過滅菌した尿素溶液100mlを加える。.

それは前述のように滅菌チューブに分配されている.

Christensenのスープまたは尿素寒天

-尿素溶液の調製

29グラムの脱水尿素を量り、100 mlの蒸留水に溶かす。ろ過方法を使用して滅菌します。オートクレーブしない.

-尿素ベース寒天

脱水ベース寒天24 gを蒸留水950 mlに溶解します。オートクレーブ中で121℃で15分間滅菌する。それが50℃の温度に達するまで放置し、無菌的に前に調製した尿素を加える。.

4〜5 mlを滅菌チューブに注ぎ、固化するまで傾けます。長いフルートのピークがあるはずです.

この培地は液体の形でも調製できる。.

用途

プロテウスが提供する迅速な反応を考えると、尿素検査は、プロテウス属を他の腸内細菌科属と区別するのに非常に有効です。.

Christensenの構成が使用されている場合、テストは同じ属の種を区別するのに役立ちます。例えば, S. haemolyticusとS. warneri sに ブドウ球菌 コアグラーゼ陰性およびベータ溶血性, しかし彼らはそれが違う S.ヘモリチカス それは負の尿素です S. warneri それは正の尿素です.

一方、McNultyは2％Christensen尿素ブロスを使用しての存在を研究しました。 ヘリコバクターピロリ 胃粘膜から採取した生検サンプル中.

の存在 H.ピロリ それは陽性の尿素テストで証明されています。結果を観察する期間は、存在する微生物の量に正比例します.

見てわかるように、それはの診断のための簡単な方法です。 ヘリコバクターピロリ 胃生検における.

最後に、この試験はブルセラ属、ボルデテラ属、バチルス属、ミクロコッカス属およびマイコバクテリア属の種を区別するのにも有用である。.

尿素テストの播種

２つの方法は結果を最適化するために強力な微生物接種物を必要とする。細菌コロニーは、いくつかの例外を除いて、血液寒天およびサブロー寒天酵母から採取するのが好ましい。接種材料は液体培地に乳化されています.

株が細菌である場合にはプロテウス属の株を探しているだけであることを知って、スチュアート尿素ブロスについては３７℃で２４から４８時間インキュベートした。酵母の場合は、37℃または室温で24〜48時間のインキュベーションが可能です。.

Christensen尿素ブロスの場合は、37℃で24時間インキュベートします。検査結果が陰性の場合は、最大6日間インキュベートできます。検査が6時間前に陽性であれば、それはプロテウス属の株であることを示しています.

クリステンセン尿素寒天培地の場合、寒天斜面に穴をあけずに強く接種する。ブロスは同じ方法で培養され、解釈されます.

品質管理

以下のように、対照株を用いて培地を試験することができる。 プロテウスミラビリス ATCC 43071, 肺炎桿菌  ATCC 7006003, 大腸菌 ATCC 25922と ネズミチフス菌.  最初の2つは肯定的な結果を与え、最後の2つは否定的な結果を与えなければなりません.

参考文献

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