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MIOミディアムファンデーション、準備と用途
の ハーフミオ 腸内細菌科に属する細菌の種の同定に役立つために使用されている生化学的試験です。それは非常に栄養価が高く、ブドウ糖、酵母エキス、ペプトン、トリプテン、L-オルニチン塩酸塩、ブロモクレゾールパープル、寒天で構成されています.
その頭字語の意味（MIO）は、この媒体で観察できる各パラメーターを説明しています。運動性、インドールとオルニチン。運動性は、べん毛の存在によって微生物が動く能力です。この性質が観察されるためには、培地の粘稠度が半固体でなければならないので、調製物はより少量の寒天を有する。.
インドール産生は、アミノ酸トリプトファンに作用するトリプトファナーゼ酵素の存在を証明しており、インドール産生を可視化するための顕示試薬の使用が必要である。.
最後に、オルニチンは、細菌がアミノ酸を脱炭酸することができるかどうか、すなわちそれが酵素オルニチンデカルボキシラーゼを有するかどうかを決定する。.
索引
- 1財団
- 1.1ペプトン、酵母エキス、トリプテイン
- 1.2運動性
- 1.3グルコース
- 1.4 L-オルニチン
- 1.5 pHインジケーター
- 2種苗開発技術
- 3準備
- 3.1 MIO中
- 3.2 Kovacs試薬（インドールテスト開発者）
- 4使用
- 5品質管理
- 6参考文献
財団
ペプトン、酵母エキス、トリピン
これらの要素はこの媒体の栄養力に貢献する。それらは細菌の開発のための栄養素そして必須アミノ酸の源として役立つ.
さらに、トリプトファンはトリプトファンの供給源であり、インドール、ピルビン酸、アンモニアおよびエネルギーを放出する還元的脱アミノ化によってトリプトファンを分解する酵素トリプトファナーゼの存在を証明する。.
インドールは無色であるので、その存在は、両方ともp-ジメチルアミノベンズアルデヒドと共に、5滴のEhrlichまたはKovacs試薬を加えることによって明らかにされる。.
この化合物のアルデヒド基はインドールと反応し、寒天表面にリング状のフクシアレッド製品を生成します。.
色の痕跡は肯定的な証拠として考慮されるべきです。しばらくすると色が劣化するので、テストはすぐに読むべきです.
一方、このテストはオルニチンの運動性と脱炭酸の結果を記録した後に明らかにされるべきです。.
解釈
陽性テスト： Kovacs試薬滴を添加したときのフクシアレッドリングの形成.
陰性試験： 環形成はありません.
運動性
バクテリアが動く能力は、混濁した培地が観察された場合、または最初の接種のまわりに広がる増殖の太い線がある場合に証明されます。.
陰性運動性試験は、細い成長線を観察することによって証明され、そして周りのすべては成長なしであろう.
試薬の添加は培地全体を曇らせるので、運動性をインドールを明らかにする前に読むことが重要である。.
移動性であるが成長が遅い細菌では、この培地でそれらの運動性を実証することは困難である。この場合は、運動性培地やドロップドロップ法などの他のテストや方法を使用することをお勧めします.
グルコース
グルコースはエネルギーを供給することに加えて培地を酸性化する発酵性炭水化物であり、アミノ酸オルニチンの脱カルボキシル化が起こるために必要な条件である。.
ブドウ糖の発酵は、腸内細菌科に属するすべての細菌がブドウ糖を発酵させるという原則に基づいて、常に行われるべきです。.
Lオルニチン
バクテリアが酵素オルニチンデカルボキシラーゼを生産するならば、培地がグルコースの発酵によって酸性化されるとそれは作用するかもしれません.
オルニチンデカルボキシラーゼ酵素はアミノ酸のカルボキシル基に作用して、培地を再びアルカリ性にするプトレシンと呼ばれるアミンを生成します。.
あなたが偽陰性でテストを誤解することができる前に読むことを試みるならば、このテストはインキュベーションの24時間後に読まれるべきです.
最初に起こる反応はグルコースの発酵であるため、最初の段階（最初の10〜12時間）で培地が黄色くなることを忘れないでください。その後オルニチンの脱炭酸が起こると、培地は紫色に変わるでしょう。.
Kovacs試薬を添加すると培地の色が変化するため、インドールを明らかにする前にオルニチン脱炭酸テストを解釈することが重要です。.
解釈
陰性試験： ミディアムイエローまたは黄色の背景.
陽性テスト： 完全に紫色.
PHインジケーター
この場合、ブロモクレゾールパープルが使用されます。途中でpHの変化があったときにそれを明らかにする担当者。酸性化するとインジケーターは黄色に変わり、アルカリ化すると紫色に変わります.
種子と開発技術
ＭＩＯ培地を植えるために、直線ループまたは針が使用され、それと共に研究されるコロニーの一部が集められる。.
MIO媒体に深く穿刺する。同じ場所で穿刺が行われていない場合、誤った運動性の画像が得られる可能性があるため、二重穿刺を行うことはお勧めできません。.
好気的に37℃で24から48時間インキュベートする。運動性、オルニチンの脱炭酸、そして最後にインドールを明らかにするという順序で結果を観察してください。.
無菌的に2 mlの培地をとり、それを滅菌チューブに移し、そこでインドール試験を行うことをお勧めします。陰性の場合は、元のチューブの残りの部分を24時間インキュベートして、インドールを再び明らかにすることができます。.
インドールの発生は次のようにして行われる：３〜５滴のKovacs試薬をＭＩＯ媒体に加えそして激しく撹拌する。フクシアの赤い輪が現れるかどうかが観察されます.
準備
ハーフMIO
ＭＩＯ培地３１グラムを量り、１リットルの蒸留水に溶かす。.
寒天が完全に溶解するまで頻繁に攪拌しながら、混合物が１分間沸騰するまで加熱する。蓋付きの13/100試験管に4 mlの培地を分注する.
オートクレーブで121℃で15分間滅菌する。オートクレーブから取り出し、半固体のブロックが形成されるように、ラックの中でまっすぐに立てます。.
2〜8℃の冷蔵庫に保管する菌株を植える前に和らげる.
脱水された媒体の色はベージュ色で、媒体の色はわずかに紫色の乳白色に調製された.
調製培地の最終ｐＨは６．５±０．２である。
培地は酸性pHで黄色に変わり、アルカリ性pHでは紫色です。.
Kovacs試薬（インドールテスト開発者）
この試薬は以下のように調製される。
１５０ｍｌのアミル、イソアミルまたはブチルアルコール（３つのうちのいずれか）を計量する。その中に１０ｇのｐ－ジメチルアミノベンズアルデヒドを溶解する。続いて50mlの濃塩酸をゆっくり加える。.
調製した試薬は無色または淡黄色である。それは琥珀色の瓶に保存され、冷蔵庫に保管されるべきです。こげ茶色はその劣化を示す.
また、Kovacs試薬はEhrlich試薬に置き換えることができます。後者は、より敏感であるため、いくつかのグラム陰性非発酵桿菌および特定の嫌気性菌のように、最小量でそれを産生する細菌中のインドールを明らかにするために好ましい。.
使用する
この培地は、腸内細菌科に属する細菌を同定するための一連の生化学的検査を補完する検査です。.
オルニチンの脱カルボキシル化データは、 赤痢菌, これは、 Shigella boydii、Shigella flexneriおよびS. dysenterieae, それはネガを与える.
それはまた陰性を与えるクレブシエラ属、その種のほとんどが陽性であるエンテロバクター属を区別する。.
品質管理
ＭＩＯ培地のバッチが調製されるたびに、対照試験を実施することができる。このために、既知または公認株が培地の挙動を観察するために使用されます。.
使用できる株は Escherichia coli、Morganella morganii、Klebsiella pneumoniae、Enterobacter aerogenes そして プロテウスミラビリス.
期待される結果は 大腸菌とM. morganii. ダンM：+、I：+、O： +.
肺炎桿菌 負の値をすべて与えます（M： - 、I： - 、O :-). プロテウスミラビリス そして Enterobacter aerogenes dan M：+ I： - とO： +.
参考文献
- Ｍａｃ Ｆａｄｄｉｎ Ｊ．（２００３）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的試験第3版社説Panamericanaブエノスアイレスアルゼンチン.
- Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断第5版社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
- 研究所ブリタニア。 MIO Medio2015。britanialab.comで入手できます。
- BDラボラトリーズBBL運動性インドールオルニチン（MIO）培地。 2007年から入手可能：bd.com
- バルテックラボラトリーズ中Ｍ．運動性、インドール、オルニチン。 2010で利用可能：andinamedica.com