Voges-Proskauerテストの基礎、準備および用途



の Voges-Proskauer検定 腸内細菌科に属する細菌を識別するのに役立つ生化学的検査です。特にそれはの株を区別するのに便利です。 大腸菌 の クレブシエラとエンテロバクター, とりわけ.

この試験は、頭字語ＲＭ ／ ＶＰによりよく知られているメチルレッド - ヴォージュプロスカウアーと呼ばれる液体培地中で行われる。この培地は、緩衝化ポリペプトン、グルコース、リン酸二カリウムおよび蒸留水で構成されています。.

現在のRM / VP培地は、もともと低濃度のペプトンとグルコースを含んだClark and Lubs培地の改良版です。それ故、正のVoges-Proskauer反応に必要とされるより少ない水素イオンが生成された。.

この試験は、酸素とアルカリ性pHの存在下で、微生物がブチレングリコール経路を介してグルコースを使用し、アセトインと呼ばれる中性の最終生成物を形成する能力に基づいています。.

RM / VP培地では、Voges-Proskauer検定を明らかにできることに加えて、メチルレッド検定も明らかにすることができます。.

索引

  • 1財団
    • 1.1 Voges-Proskauer検定の基礎
    • 1.2テストと解釈の発展のための基礎
  • 2準備
    • 2.1中RM / VP
    • 2.2 Voges A試薬
    • 2.3 Voges B試薬
  • 3 Voges-Proskauerテストの手順
    • 3.1テストの開発
  • 4使用
  • 5品質管理
  • 6参考文献

財団

Voges-Proskauer検定の基礎

培地中に存在するプリペプトナは、細菌の増殖に必須の栄養要件を提供する。その部分については、グルコースが主な化合物です。多くのバクテリアはグルコースを代謝しピルビン酸を形成する能力を持っています.

ピルビン酸はグルコース代謝の中間点であり、そこから各微生物は異なる経路をとることができる。乳酸、酢酸、ギ酸、コハク酸などの混酸を形成するものもあれば、2,3-ブタンジオールなどの中性生成物を形成するものもあります。.

Voges-Proskauer試験は、好気的条件下で2,3-ブタンジオールの中間生成物であるアセチルメチルカルビノール（アセトイン）を形成する微生物の能力を明らかにする.

アセトインは還元されて２，３－ブタンジオールを形成するが、この反応は可逆的であるので、２，３－ブタンジオールが酸化されるとアセトインが形成される。したがって、酸素は不可欠です.

リン酸二カリウムは、６．９±０．２のｐＨで混合物を湿らせる緩衝剤である。.

テストと解釈の発展のための基礎

反応を実証するには、Voges AとVoges Bとして知られる2つの試薬（Barrit試薬）を使用して開発を実行する必要があります。.

Ｖｏｇｅｓ Ａは５％のα－ナフトール溶液であり、そしてＶｏｇｅｓ Ｂは４０％の水酸化カリウム調製物である。水酸化カリウムが利用できない場合は、40％水酸化ナトリウムに置き換えることができます.

α-ナフトールは反応の色の強さを増す触媒であり、それは試験をより敏感にする。 α-ナフトールは常に最初に添加しなければならず、培地が酸素と接触するようにチューブを攪拌する。このようにして、存在するアセトインはジアセチルに酸化され、そして２，３−ブタンジオールは酸化されてアセトインを形成し、それをジアセチルに通過させる。.

これはα-ナフトールがジアセチルにどのように結合するかであり、それは次にアミノ酸アルギニンに存在するグアニジン核に結合しています。後者はプルリペトナ由来です。.

その部分については、水酸化カリウムまたは水酸化ナトリウムがCOを吸収する原因である2 そしてペプトンと反応する。この反応により、ピンクサーモン色が形成され、チューブをよく振った後にはっきりと見えます.

着色が瞬時に起こるためには、正しい量のジアセチル、ペプトンおよびα－ナフトールを混合しなければならない。これが起こらない場合、解釈する前にチューブを15分間休ませてください.

通常、このテストは2〜5分後に陽性となり、弱いピンク色が観察されます。 30分から1時間静置すると色の濃さが最大になります（濃い赤）。.

ブロスが黄色の場合、陰性テストが明らかになります。 １時間後、試験が陰性であれば、α－ナフトール上での水酸化カリウムの反応の結果として銅色が形成され得る。.

準備

中RM / VP

脱水培地17 gを量り、蒸留水1リットルに溶かします。 5分間放置してください。沸騰するまで加熱して完全に溶かす。チューブに3〜4 ml入れ、121℃で15分間オートクレーブ滅菌する。.

脱水培地はベージュ色で、調製培地は淡琥珀色です。.

培地の最終ｐＨは６．９±０．２である。.

Voges A試薬

５ｇのα－ナフトールを秤量し、５０ｍｌのエチルアルコール（無水）に溶解する。続いてエチルアルコールを加え続けて100mlにする。.

試薬ボージュB

４０ｇの水酸化カリウムを秤量し、ビーカー中で５０ｍｌの蒸留水に溶解する。溶解時に製剤が急激に上昇するため、ガラスを冷水浴に入れて温度を制御する必要があります。.

溶液が冷えた後、それを目盛り付きバルーンに移し、蒸留水で１００ｍＬにする。.

Voges-Proskauer検定の手順

Voges-Proskauer試験を実施するために、RM / VPブロスに、18〜24時間の純粋培養から、試験中の微生物を接種する。.

接種材料は濃すぎてはいけません。 35〜37℃で24〜48時間インキュベートしますが、数日間インキュベートする必要がある場合もあります。 CowanとSteelは、Enterobacteriaceae科のすべての陽性Voges-Proskauer（VP）種を検出するのに必要な最小潜伏期間は5日であると考えています.

テストの開発

1 mLのアリコートをチューブに分けて、次のように展開を行います。12滴（0.6 mL）のVoges A試薬と4滴（0.2 mL）のVoges Bを入れます。通気して放置します実行する前に5 - 10分間。しかし、それでも試験が陰性であれば、30分から1時間後に試験管を立てて観察します。.

ピンク - 赤色の外観は、Voges-Proskauer反応が陽性であることを示しています。媒体が黄色のままであれば、反応は陰性です。.

示されている順序と量で開発者を追加することは、誤検知を避けるために不可欠です。.

使用する

Voges-Proskauer検定は、次の株を区別するのに役立ちます。 大腸菌 これらは、とりわけVP陽性である、クレブシエラ属、エンテロバクター属、セラチア属のうち、VP陰性である。.

品質管理

対照株を用いて調製培地の品質を試験することができる。 大腸菌 ATCC 25922, 肺炎桿菌 ATCC 700603, プロテウスミラビリス ATCC 43071, ネズミチフス菌と Enterobacter cloacae ATCC 13047.

期待される結果は、Voges-Proskauerによる正の反応です。 肺炎桿菌 そして E.クロアカエ. 残りは否定的な反応を与える.

参考文献

  1. 研究所ブリタニア。 MR-VPミディアム。 2015年。www.britanialab.comから入手できます。
  2. マイクロキット研究所M-Ident Vogesプロスカウアー。入手可能：http://www.medioscultivo.com
  3. Ｍａｃ Ｆａｄｄｉｎ Ｊ．（２００３）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的試験第3版社説Panamericanaブエノスアイレスアルゼンチン.
  4. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  5. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断第5版社説Panamericana S.A.アルゼンチン.