シモンズクエン酸塩寒天の基礎、調製および使用



の シモンズクエン酸塩寒天 それは微生物、特にグラム陰性桿菌を同定するための生化学的試験として使用される固体培地です。元の媒体は1923年にコーザーによって作成されました.

Koserのクエン酸塩培地は、リン酸ナトリウム、リン酸アンモニウム、リン酸一カリウム、硫酸マグネシウムおよびクエン酸ナトリウムを含むブロスからなっていた。.

理解できるように、培地中の唯一の炭素源はクエン酸塩であり、そして窒素はリン酸アンモニウムであり、タンパク質および炭水化物はこれらの元素の供給源として省略されており、それらは他の培地中に一般に存在する。.

したがって、その培地に接種された細菌は、それがクエン酸炭素を摂取することができる場合にのみ繁殖することができる。培地に濁りがあれば試験は陽性であったが、非特異的な濁りが生じる可能性があるという不都合があった。.

この問題は、Koserのオリジナルの処方にSimmonsが寒天とブロモチモールブルーを追加することで解決されました。原理は同じですが、解釈が異なります.

索引

  • 1財団
    • 1.1播種モード
    • 1.2解釈
  • 2準備
  • 3使用
  • 4最後の検討事項
    • 4.1接種材料
    • 4.2播種
    • 4.3色の濃さ
  • 5参考文献

財団

いくつかの細菌は、発酵または乳酸の生産がなくても生き残る能力を有し、他の基質の使用を通してエネルギーを得る必要がある。この試験で提供される唯一の炭素源はクエン酸塩です。.

これらの条件下で生き残ることができる細菌は、トリカルボン酸サイクルまたはクエン酸発酵サイクルを使用して、伝統的な経路に代わるものを介してクエン酸を迅速に代謝する。.

細菌によるクエン酸塩の異化は、補酵素Aの介入なしに酵素的メカニズムを構成する。この酵素は、クエン酸（クエン酸オキサロ酢酸リアーゼ）またはクエン酸デスモラーゼとして知られている。反応は二価カチオンの存在を必要とし、それはこの場合マグネシウムにより供給される。.

反応はオキサロ酢酸およびピルビン酸を生成し、それは次に窒素源の使用により形成されるアルカリ性ｐＨの中間で有機酸を生じる。これらの有機酸は炭酸塩や重炭酸塩を生成する炭素源として使われ、さらに培地をアルカリ化します。.

播種モード

シモンズクエン酸塩培地は、直線ループまたは針を用いて魚の尾部に軽く接種し、そして３５〜３７℃で２４時間インキュベートするべきである。結果が観察される時間の終わりに.

播種は寒天の表面にのみ行われます。パンクしない.

解釈

培地が元の色（緑色）で目に見える成長がない場合は、テストは陰性ですが、培地が青色に変わる場合は、pH指示薬によって検出されるアルカリ性生成物の存在を示します。この場合、テストは陽性です.

これは、細菌がクエン酸の炭素を使用している場合、アンモニアを放出するリン酸アンモニウムの窒素も吸収し、培地をアルカリ化することができるために起こります。.

他方、培地中で細菌の増殖が観察されたが色の変化がない場合、試験は陽性と見なされるべきである。増殖があればそれは細菌が炭素源としてクエン酸塩を使用することができたことを意味する。現時点ではpHの変化はありませんが（時にはそれがかかる場合があります）.

最終色の解釈に疑問がある場合は、接種されていないクエン酸塩の試験管と比較することができます。.

準備

1リットルの水に対して24.2グラムの脱水媒体を量ります。混合して約5分間放置します。頻繁に攪拌しながら、1〜2分間加熱して媒体の溶解を完了します。.

試験管に４ｍｌ入れ、１２１℃で１５分間オートクレーブする。オートクレーブを離れるときは、寒天がひび割れや底のない、より傾斜したフルートのピークの形で固まるように、サポートを使って傾けます.

クエン酸塩培地の最終ｐＨは６．９（緑色）である。この培地はpHの変化に非常に敏感です.

pH 6以下では、培地は黄色に変わります。この色はバクテリアによるテストでは観察されません.

そしてpH 7.6以上では、培地は強いプルシアンブルーに変わります。.

使用する

シモンズクエン酸塩寒天培地は、特定の微生物、特に腸内細菌科に属する桿菌および他のグルコース非発酵桿菌の同定に使用される。.

最終検討事項

シモンズクエン酸培地は、特定のエラーが発生した場合に偽陽性が得られる可能性があるため、非常に繊細なテストです。.

注意が必要なのは次のとおりです。

接種物

他の培地に影響を与えずに、植える場所に黄色の銅色が発生する可能性があるため、非常に濃いまたは負荷のある細菌接種物を作らないでください。しかし、それは成長があるという信念につながる可能性があります。テストの陽性を意味するものではありません.

同様に、死にかけているバクテリアの細胞壁の中に予め形成された有機化合物がpH指示薬を変えるのに十分な炭素と窒素を放出することができるので、厚い接種物は偽陽性を生成することができます.

したがって、理想は、余分な材料を使わないようにするために、プラチナハンドルの代わりに針を使って植えることです.

播種

他方、問題の微生物の同定のために一連の生化学的試験が植えられているとき、他の媒体からのタンパク質または炭水化物の引きずりを避けるために、クエン酸塩試験が最初に接種されることが重要である。.

誤って導入されたこれらの物質のいずれかが代謝されてpHの変化を引き起こすので、この状況下では偽陽性を得ることが可能である。.

物質の引きずりを防ぐもう1つの方法は、ハンドルをしっかりと燃やして、1つのテストと別のテストの間に新しい接種材料を接種することです。.

植菌を行うためにコロニーに触れるときにも注意を払う必要があります。寒天の一部を細菌が由来する培養液から引きずらないようにするためです。.

この意味で、Matsen、SherrisおよびBransonは、クエン酸塩テストを接種する前に他の炭素源の移動を避けるために接種材料を生理学的溶液で希釈することを推奨しています。.

色の濃さ

試験が陽性であるときに生成される色の強度は、商業施設によって異なる可能性があることを考慮に入れる必要があります。.

さらに、24時間で陽性反応を示す微生物もありますが、pHを変化させるのに48時間以上かかるような菌株もあります。.

参考文献

  1. Ｍａｃ Ｆａｄｄｉｎ Ｊ．（２００３）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的試験第3版社説Panamericanaブエノスアイレスアルゼンチン.
  2. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  3. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断第5版社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  4. BDラボラトリーズBBLシモンズクエン酸寒天培地2015年から入手可能：bd.com
  5. 研究所ブリタニア。シモンズクエン酸塩寒天。 2015年に入手可能：britanialab.com
  6. バルテック診断研究所。シモンズクエン酸塩寒天。 2016年に入手可能：andinamedica.com.