寒天は標準的な基礎、準備および使用法を有する



の スタンダードアカウント寒天 は、飲料水、廃水、牛乳飲料などの食品中に存在する好気性微生物負荷を定量するために設計された、固体の非選択的培地です。この培地はEnglish Plate Count Agarの頭字語でPCA寒天としても知られています。 1953年にBuchbinder、Baris、Goldsteinによって作成されました。.

標準的な寒天培地は、酵母エキス、トリプテン、グルコース、寒天、蒸留水で構成されています。この配合は現在の好気性微生物負荷の開発を可能にする基本的な栄養素を含んでいます。.

培地にはインヒビターが含まれていないため、バクテリアは何の制限もなく発育することができるので、一般的なコロニー数には理想的です。しかしながら、プレート定量化技術は、存在する全ての細菌を検出するのではなく、標準的な播種寒天培地がさらされる環境条件下で増殖することができるもののみを検出するであろう。.

この意味で、プレート定量化技術は、一般的に好気性中温型細菌、すなわち、25〜40℃の温度で増殖し、37℃の最適増殖温度で増殖するものの量を決定しようとしている。.

この細菌グループは非常に重要です、なぜなら人のための病原菌のほとんどがあるからです.

食品中に存在する好冷細菌の量を定量化することが時には興味深いかもしれないことに注意すべきです。これらの細菌は低温で発生するものです< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

同様に、50℃〜80℃以上の範囲で増殖する好熱性細菌は、缶詰などの特定の種類の食品では重要になる可能性があります。.

微生物定量は、サンプル1グラムまたは1ミリリットルあたりのコロニー形成単位（CFU）で表されます。.

索引

  • 1財団
  • 2準備
    • 2.1プレート注入技術
    • 2.2植栽用
  • 3使用
    • 3.1プレート注入技術（深さでシード）
    • 3.2表面に蒔かれたテクニック
  • 4品質管理
  • 5制限
  • 6参考文献

財団

酵母エキス、トリフェインおよびグルコースは良好な微生物開発に必要な栄養素を提供するので、標準的な計数培地は要求のない好気性細菌の満足のいく開発を可能にするように設計されています.

一方、培地は鮮明な色と透明な外観を持っているため、ディープシード（プレートへの注ぎ込み）の方法によって開発されたコロニーを表示するのに理想的です。.

ドリガルスキーのスパチュラで表面に播種する方法でコロニーを数えることも可能です。.

微生物負荷が高い場合、CFUを数えるために研究対象のサンプルの10進希釈をしなければなりません.

この媒体は、アメリカ公衆衛生協会（APHA）によって好気性中温菌の計数に推奨されていることに注意してください。.

準備

脱水媒体23.5グラムを量り、蒸留水1リットルに溶かす。混合物を完全に溶解させるためには、沸騰するまで頻繁に撹拌しながら加熱しなければならない。以下のステップは、使用されるシーディング技術によって異なります.

プレート流し込み技術

試験管に１２から１５ｍｌを分注することによって分配する。その後、121℃のオートクレーブで15分間滅菌します。ブロックの形で垂直方向に固化することができます。使用するまで冷蔵庫に保管する.

使用する予定のキューを溶かします。サンプルが調製されている間、溶けたら、44〜47℃のウォーターバスでそれを保ちます.

表面に植えるため

121℃のオートクレーブで培地を滅菌してから、滅菌ペトリ皿に20ミリリットルを配布します。固化し、転倒させて使用するまで冷蔵庫に保存する.

使用前にプレートを焼き戻します。培地のpHは7.0±0.2であるべきです.

使用する

寒天標準計数は、水と食物の微生物学的分析の間の好気性中温菌計数技術で使用されます。それは研究中のサンプルの衛生的な品質を決定するので、好気性中温菌の計数は必要です.

（この媒体を使用して）この技術を適用すると、それらの定量化のために単離されたコロニーの巨視的可視化が可能になる。.

プラーク注入技術（深さでシード）

-手続き

この手法は次のもので構成されています。

１）存在する細菌を再分配するために試料を均質化する。.

２）最初の懸濁は、滅菌バイアルまたはバッグ中で、９０ｍｌの希釈剤中の１０ｇまたは１０ｍｌのサンプルの比率を考慮して行われる（１０ｍｌ）。-1）.

3）最初の懸濁液から、サンプルの種類に応じて適切な10進希釈が行われます。例：（10-2, 10年-3, 10年-4）希釈はペプトン水またはリン酸緩衝液で行われます.

これを行うには、最初の懸濁液を1 ml取り、9 mlの希釈液に入れます。必要ならば希釈を続けます。ここで1 mlの希釈液を取ります。-2 など.

４）各希釈液１ｍｌを取り、空の滅菌ペトリ皿に入れる。.

５）各プレートに、予め融解して４４〜４７℃に設定した１２〜１５ｍｌの標準計数寒天を添加する。.

６）サンプルを寒天に均一に分配し、固化させるためにプレートに滑らかな回転運動を与える。.

７）プレートを逆にし、エアロビオシス中３７℃で２４から４８時間インキュベートする。.

8）時間が終了したら、プレートを調べてそれを可能にする希釈液中のコロニーを数えることに進みます。それは30から300 CFUの間にあるそれらのプレートを数えるために選ばれます.

計数は手動で行うことができ、またはコロニー計数装置を使用することができる。.

サンプル1mlあたりの許容値は、それらが管理されている基準に応じて国によって異なります。.

-UFCの計算

一般的な計算は次の式を使って行われます。

結果を1桁または2桁で表し、適切な基数10を掛けます。例：結果が16.545の場合、3桁目に基づいて17.000に丸められ、次のように表されます。1.7 x 104. さて、結果が16,436であれば16,000に丸められ、1.6 x 10と表現されます。4.

表面に植えられた技術

-手続き

-直接サンプルが液体の場合は、最初の懸濁液0.1 mlを接種する。-1 または連続希釈の場合10-2, 10年-3 など、標準的なアカウントの寒天プレートの真ん中に.

-試料をDrigalskiスパチュラまたはL字型のガラス棒で均等に分注し、10分間放置します。.

-プレートを逆にし、エアロビオシス中、37℃で24〜48時間インキュベートする。.

-コロニーの数え始めて、20 - 250 CFUの範囲にあるそれらのプレートを選びなさい.

-UFCの計算

計算には、希釈率が適用されます。これは逆です。この数字は、有効数字2桁に四捨五入され（3桁目の四捨五入）、10進法で表されます。-1）、22 x 10が報告されています1  UFC、しかし数字が225であれば23 x 10と報告されている1 UFC.

今、あなたが希釈で199 CFUを数えるなら10-3, 20×10が報告されます4 UFC、ただし153 CFUが同じ希釈でカウントされた場合、15 x 10が報告されます。4 UFC.

品質管理

標準計数培地は、以下のような既知の公認株を用いて評価することができる。 大腸菌 ATCC 8739, 黄色ブドウ球菌 ATCC 6538, 枯草菌 ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, 表皮ブドウ球菌 ATCC 12228, シゲラフレックスネリ ATCC 12022.

培地が最適条件にある場合は、以下を除いてすべての場合で十分な増殖が期待されます。 L. fermentum それは定期的なパフォーマンスを持つことができます.

培地の無菌性を評価するために、調製された各バッチ（接種されていない）のうちの１つまたは２つのプレートをエアロビシス中で３７℃で２４時間インキュベートすべきである。この時点で、培地の成長や色の変化は観察されないはずです。.

制限事項

-寒天を2回以上溶かさないでください.

-それが冷蔵庫に保管され、光から保護されている限り、調製培地は3ヶ月まで持続することができます.

-この培地は、要求の厳しい微生物や嫌気性菌には適していません。.

参考文献

  1. 医薬品の食品と医療技術の国家行政（ANMAT）。食品の微生物分析、公式の分析方法論、指標微生物。 2014 Volume 3、anmat.gov.arから入手できます。
  2. ディフコフランシスコソリアメルギゾラボラトリーズ、Ｓ。プレートカウント寒天培地。 2009年に入手可能：http://f-soria.es
  3. ラボラトリーズコンダプロナディサ。 APHAおよびISO 4833に準拠した標準的な方法（PCA）用の寒天培地。condalab.comで入手できます。
  4. 研究所ブリタニア。寒天プレート上で数える。 2015年に入手可能：britanialab.com
  5. Camacho A、Giles M、OrtegónA、Palao M、Serrano BおよびVelázquezO.2009。食品の微生物学的分析のための技術。第2版UNAMケミカル学部メキシコで入手可能：depa.fquim.unam