寒天LIA（リジン鉄）の基礎、調製および使用



の LIA寒天 （リジン鉄）は、腸内細菌科の細菌を識別するために使用される生化学的試験です。この媒体は、Falkowの公式に基づいて、EdwardsとFifeによって作成されました。.

もともとこの試験はペプトン、酵母エキス、グルコース、L-リジン、ブロモクレゾールパープル、蒸留水を含むブロスでした。 Edwards and Fifeに寒天、クエン酸第二鉄アンモニウム、チオ硫酸ナトリウムを添加.

試験は、基本的に、アミノ酸L-リジンのカルボキシル基と反応することができる酵素リジンデカルボキシラーゼの存在を証明することからなる。アミノ酸の脱アミノ化はまた、酵素リジンデアミナーゼの存在により起こり得る。.

さらに、培地の組成は、硫化水素を生成するためのいくつかの細菌属の能力を実証することを可能にする。最後に、途中でガスの発生の有無を観察することも可能です。.

索引

  • 1財団
    • 1.1ペプトンと酵母エキス
    • 1.2グルコース
    • 1.3 L-リジン
    • 1.4 pH指示薬（ブロモクレゾールパープル）
    • 1.5クエン酸第二鉄アンモニウムとチオ硫酸ナトリウム
  • 2テストの解釈
    • 2.1リジンの脱炭酸
    • 2.2リジンの脱アミノ
    • 2.3硫化水素（H 2 S）の製造
  • 3結果の記録
  • 4準備
  • 5つの用途
  • 6参考文献

財団

ペプトンと酵母エキス

ほとんどの培地と同様に、鉄リジン寒天培地はバクテリアの成長に必要な栄養源を提供する成分を含んでいます。これらの成分はペプトンと酵母エキスに代表されます.

グルコース

また、この寒天は発酵性炭水化物グルコースを含んでいます。腸内細菌科のすべての細菌がグルコースを発酵させることが知られている.

この工程は、培地を酸性化すること、酵素リジンデカルボキシラーゼが存在する場合にはそれがその基質に作用するための必須条件であることから、重要である。.

いくつかの細菌属では、グルコースの発酵によるガス生成が観察され得る。.

チューブ内で寒天が置換されたとき、チューブの底部に空のスペースが残ったとき、または培地を2つ以上の部分に分割することによって、ガスが証明されます。.

L-リジン

リジンが脱炭酸されると、ジアミン（カダベリン）と二酸化炭素が形成されます。.

脱カルボキシル化は、補酵素ピリドキサールホスフェートの存在下で起こる。この反応は不可逆的です.

PH指示薬（ブロモクレゾールパープル）

異なる反応によって培地中で生じたｐＨの変化は全てブロモクレゾールパープルｐＨ指示薬によって検出される。.

この意味で、酸性化があると培地は黄色に変わり、アルカリ化があると培地は元の紫または紫の色に戻ります。.

酵素リジンデアミナーゼの存在によりリジンの脱アミノ化が起こると、表面に赤みがかった色が形成され、これはプロテウス属、プロビデンシア属およびいくつかのモルガネラ属に典型的なものである.

これは、脱アミノ化プロセスの間にアルファ - ケト - 炭酸が形成され、それが酸素の存在下でクエン酸アンモニウムと反応し、それが前述の色を生じさせるという事実による。.

クエン酸第二鉄アンモニウムとチオ硫酸ナトリウム

一方、硫化水素を生成する細菌は、チオ硫酸ナトリウム（硫黄源）とクエン酸第二鉄アンモニウムの存在によって証明されます。2S.

チオ硫酸レダクターゼ酵素を有する細菌は、存在するチオ硫酸ナトリウムを還元することによって作用し、亜硫酸塩および硫化水素（H）を形成する。2S）.

後者は無色の気体ですが、それが鉄塩と反応すると不溶性化合物である金属鉄硫化物を形成します（目に見える黒い沈殿物）.

しかし、H生成能力2Hを生産することができるいくつかの負のリジンデカルボキシラーゼバクテリア2Sは、黒色の沈殿物を形成しません。これは、培地の酸性度が妨げるためです。そのため、鉄を含む他の方法で確認することをお勧めします.

テストの解釈

リジンの脱炭酸

チューブは24時間のインキュベーション終了後に読まれるべきです、そうでなければ偽陰性を報告して、反応を誤解する危険性があります.

最初に起こる反応はグルコースの発酵であることを覚えておかなければならない、それ故に10から12時間後の全ての管は黄色に変わるだろう.

インキュベーション期間（24時間）の終わりに、紫色または紫色の表面を持つ黄色の背景が観察された場合、反応は陰性です。表面の紫色は、ペプトンの使用による培地のアルカリ化に対応しています.

ポジティブ反応とは、チューブの底部と表面が完全に紫色になっている反応、つまり元の色に戻る反応です。.

したがって、テストの陽性度を決定するのは、メディアのベースまたはボトムです。色について疑問がある場合は、接種されていないLIAチューブと比較できます。.

リジンの脱アミノ

リジンの脱アミノ化を証明するチューブは、赤褐色の表面と黄色の背景（酸）、または赤褐色のチューブ全体になります。.

この反応は、リジンの脱炭酸については陰性であると解釈されるが、リジンの脱アミノについては陽性であると解釈される。.

この反作用は斜角で定義され、解釈されます.

硫化水素（Hの製造2S）

陽性反応は、培地の全部または一部に黒色沈殿物が出現することによって観察される。一般的にベベル境界とベースの間.

沈殿物がチューブ全体に発生した場合、それは培地中で起こる他の反応を示さないでしょう.

結果の記録

テストを解釈すると、結果は次のように記録されます。

最初に斜面を読み、次に底またはタコスを読み、次にHの生成を読みます。2S、そして最後にガス生産.

例：K / A +（ - ）つまり、

  • K：アルカリベゼル（紫）
  • A：酸性（黄色）バックグラウンド、すなわち、負の脱炭酸反応および負の脱アミノ.
  • +硫化水素の製造
  • （ - ）：ガスなし.

準備

35グラムのリジン寒天脱水鉄を量り、1リットルの蒸留水に溶かす.

寒天が完全に溶けるまで加熱するので、頻繁に攪拌しながら1分間煮る。蓋付きの13/100試験管に4 mlの培地を分注する.

オートクレーブで121℃で15分間滅菌する。オートクレーブから取り出し、深い底と短いベベルがあるように傾斜した方法で休憩します。.

2〜8℃の冷蔵庫に保管する菌株を植える前に和らげる.

脱水された培地の色はベージュ色で、培地は赤紫色に調製されています。.

調製培地の最終ｐＨは６．７±０．２である。

培地は、５．２以下のｐＨで黄色になり、ｐＨ６．５で紫色になる。.

用途

この試験は、他の生化学的試験と一緒に、腸内細菌科からの桿菌の同定に使用されます。.

培地をまっすぐなループまたは針で播種し、チューブの底に1つまたは2つのパンチを作り、次に培地の表面をジグザグにする.

それを好気性生菌中で35〜37℃で24時間インキュベートする。必要ならばさらに24時間インキュベートしたままにする.

それはから否定的なCitrobacterラクトース種を区別することが主に役立ちます サルモネラsp.

参考文献

  1. Ｍａｃ Ｆａｄｄｉｎ Ｊ．（２００３）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的試験第3版社説Panamericanaブエノスアイレスアルゼンチン.
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  4. 研究所ブリタニア。リジン鉄寒天2015年に入手可能：britanialab.com
  5. BDラボラトリーズBBLリジンアイアンアガースラント。 2007年から入手可能：bd.com
  6. バルテックラボラトリーズ培地Ｌ． 2009年に入手可能：andinamedica.com