寒天M.R.Sの基礎、準備および使用



の 寒天Ｍ．. は、乳酸菌、特にラクトバチルス属の乳酸菌の単離と計数に使用される選択的固体培地です。この寒天は1960年にMan、RogosaおよびSharpeによって作成されましたが、真ん中に同じ名前が付いていますが、その複雑さのために省略形のM.R.Sがよく使用されます。.

それは、プロテオースペプトン、肉エキス、酵母エキス、グルコース、ソルビタンモノオレエート、リン酸二カリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガンおよび寒天からなる。.

この組成物は、糞便、膣分泌物、経口サンプルおよび母乳、ならびに乳製品および肉食品などの臨床サンプルからの乳酸菌の適切な開発を可能にする。.

乳酸菌が病理学的プロセスに関与することはめったにないため、臨床検査室では日常的には使用されていません。しかしながら、Ｍ．Ｓ．寒天の使用は食品微生物学の分野においてより頻繁に行われている。.

一方、この培地は、乳酸菌の研究を目的とするいくつかの研究センターで使用されています。.

索引

  • 1財団
  • 2準備
  • 3つの用途
    • 3.1コロニーの特徴
    • 3.2乳酸菌の単離
    • 3.3乳酸菌のカウント
    • 3.4研究レベルで
  • 4品質管理
  • 5参考文献

財団

寒天のMan、Rogosa、Sharpeはかなり複雑な構成をしています。各コンポーネントが果たす機能を細かくすることで、その基礎を説明することができます。.

プロテオースペプトン、肉エキス、酵母エキスおよびグルコースは、バクテリアの成長に必要な炭素、窒素、ビタミンおよびミネラルの供給源を提供する栄養素です。さらに、グルコースはほとんどの培地で使用されている普遍的なエネルギー源です。.

他方、乳酸菌の増殖を促進するためには、乳酸桿菌および関連細菌の代謝に不可欠な補因子（カチオン）の存在が必要である。これらの化合物はナトリウム、マグネシウムおよびマンガンの塩です.

同様に、ソルビタンモノオレエートまたはポリソルベート80は、栄養素として吸収されたときに重要な脂肪酸の供給源です。.

さらに、ソルビタンモノオレエートおよびクエン酸アンモニウムは、付随する植物相、特にグラム陰性菌の発生を抑制することによって作用し、この寒天の選択的性質を提供する。.

最後に、寒天は培地に固体の粘稠度を与えるものです。.

Man Rogosa Sharpe agarの他の亜種があります。それらのうちの１つは、他の微生物の中でもとりわけ、ビフィズス菌の単離に非常に有用なシステイン（Ｍ．Ｒ．Ｃ．）を補給されたものである。他方、特に乳製品中のビフィズス菌の選択的計数のために、ネオマイシン、パロモマイシン、ナリジクス酸および塩化リチウムを添加したＭＲＳ培地がある。.

準備

68.25グラムの脱水媒体を量り、1リットルの蒸留水に溶かします。 5分間放置してください。全体を溶かすには、熱源に頻繁にかき混ぜながら1〜2分間沸騰させます。オートクレーブで121℃で15分間滅菌する.

オートクレーブを離れるときは数分間放置して滅菌ペトリ皿に熱いままで分配する.

プレートを固化させ、ひっくり返し、プラッカーを注文し、そして使用するまで冷蔵庫に保管する。プレートを使用する前にプレートを室温にする.

培地のpHは6.4±0.2です。いくつかの商業住宅は5.5から5.9の間のpHを推奨しています.

脱水媒体はベージュ色で、調製は濃い琥珀色です。.

脱水培地と調製したプレートの両方を2〜8℃で保存する必要があります.

用途

寒天プレートＭ．それらは表面に播種することができます（枯渇またはドリガルスキーのへらで）。それはまた深さによって播種することができます。プレートは微好気性（4％O）で37℃でインキュベートする必要があります2 そして5-10％のCO2）24〜72時間.

播種方法は、目的に応じて選択されます（分離またはカウント）。.

コロニーの特徴

Lactobacillusの推定コロニーは白っぽく成長し、この寒天上で粘液様またはクリーミーな外観を呈する。それから彼らは識別しなければなりません.

乳酸菌の単離

この目的のために、表面による植栽が使用されます。植えるサンプルには事前の手順が必要です。. 

母乳サンプルの場合、脂肪層を除去するために、サンプル1 mlを14,000 rpmで10分間遠心することをお勧めします。 ９００μｌを廃棄し、残りの１００μｌ中に沈殿物を懸濁してＭ．それからそれはDrigalskiのへらで均等に配られなければなりません.

便試料の場合、１グラムの糞便を秤量し、１ ／ １０希釈に相当する９ｍＬの０．１％滅菌ペプトン化水中にホモジナイズする。その後、10の最終希釈が得られるまで、連続希釈を行う。-4.

最後に、100μlの希釈液10を採取する。-2, 10年-3 そして10-4 そして各希釈液をMRS寒天上に播種し、Drigalskiスパチュラで均一に分配する。.

乳酸菌のカウント

この場合、播種は深さによって行われます.

母乳のサンプルの場合は、1 mLを取り、滅菌円錐プラスチックチューブに入れます。 ＭＲＳ寒天を約４０℃の温度で２５ｍＬの最終容量まで添加し、均質な混合物を得る。その後、それを均一な方法で滅菌ペトリ皿に注ぎ、それが重合するまで放置する。.

上記のように、便試料について希釈を行う。各希釈液1 mLを取り、滅菌コニカルプラスチックチューブに入れる。溶融ＭＲＳ寒天を２５ｍＬの容量まで添加する。.

各希釈液の混合物を滅菌ペトリ皿に均一に注ぐ。最後に重合するまで放置します.

研究レベルで

毎日乳酸菌の研究はより面白くなります。特に研究者は、他の用途の中でも特に、乳製品の製造における標準化のための発酵を開始することについての新しい菌株およびそれらの可能性を知ることを求めて.

この意味で、Alvarado et al。 （２００７）はＭ．Ｒ．Ｓ寒天を使用した。職人のスモークベネズエラチーズに含まれる乳酸菌を単離し、同定し、特徴付けた研究を実施する.

チーズの中で彼らは、ラクトコッカス属とラクトバチルス属の細菌の存在を発見し、そして分離された株の混合物は殺菌牛乳からのチーズの製造におけるスターター株として適していると結論を下しました。.

一方で、Sánchez等。 （２０１７）はＭ．Ｒ．Ｓ寒天を使用した。健康な子豚の生産性を高める天然プロバイオティクスとしてそれらを使用するために、子豚の消化管内の乳酸菌の存在を調査すること.

この培地で彼らは4つの種を分離することに成功しました： ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・ブレビス、エンテロコッカス・ヒラエ そして ペディオコッカスペントサセウス.

同様に、Báez等。 （２０１９）はＭ．Ｒ．Ｓ．寒天を使用した。母乳および乳児の糞便中のプロバイオティックポテンシャルを有する乳酸菌（BAL）およびビフィズス菌を評価する方法.

彼らはなんとか11 BALと3 BALを分離することができた ビフィズス菌sp 母乳で、そして8 BALと2 ビフィズス菌sp. スツールで全てがプロバイオティック活性を有する細菌としてそれらを認定する特定のパラメータを満たした.

著者らは、母乳と専ら母乳で育てられた乳児の糞便の両方がプロバイオティクス細菌の天然源として役立つと結論づけた.

品質管理

M.R.S.の品質を評価する以下のような対照株を使用することができる。

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, ラクトバチルス・カゼイ ATCC 393, ビフィドバクテリウム・ビフィダム ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, 大腸菌とセレウス菌.

期待される結果は最初の6つのバクテリアのための満足のいく成長ですが、 大腸菌 そして セレウス菌 完全に抑制されなければならない.

参考文献

  1. Alvarado C、ChacónZ、Otoniel J、Guerrero B、LópezG.アンデスの手作りスモークベネズエラチーズからの乳酸菌の単離、同定および特性評価。スターターカルチャーとしての利用科学者（マラカイボ）2007年１７（３）：３０１〜３０８に記載されている。 scielo.orgから入手できます。.
  2. SánchezH、FabiánF、Ochoa G、子豚の消化管からの乳酸菌のアルファロ単離。牧師調査。獣医ペルー2017; ２８（３）：７３０−７３６に記載されている。 scielo.orgから入手できます。.
  3. Mánda、Acevedoの自治体における母乳中のプロバイオティックポテンシャルを有する乳酸菌およびBifidobacteriaの評価、Miranda、BáezE、GonzálezG、HernándezG、2017。学士号取得のための学士号取得資格バイオ分析カラボボ大学、ベネズエラ.
  4. イギリス研究所Ｓ．寒天。 2015年に入手可能：britanialab.com
  5. ウィキペディアの貢献者。 MRS寒天ウィキペディア、フリー百科事典。 2018年1月10日、19時44分UTC。利用可能な場所：wikipedia.org 2019年2月17日アクセス済み.
  6. 乳製品中のビフィズス菌の分離と計数のためのRoy D. Media. Int J Food Microbiol, ２００１２８； 69（3）：167-82.