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寒天血液ファンデーション、使用および準備
の 血液寒天 それは濃縮された固体培地であり、異なるが選択的ではない。臨床サンプルや継代培養からの多種多様な微生物の回収と増殖に使用されます。.
実験室で受け取ったほとんどの臨床サンプルの播種には、古典的な血液寒天培地を含める必要があります。特定の変更を加えて準備されていない限り、それが有用ではない便試料を除く.
この培地は基本的に濃縮ベース寒天と5％血液で構成されています。寒天のベースは必要に応じて変えることができますが、主にペプトン、アミノ酸、ビタミン、肉エキス、塩化ナトリウム、寒天などで構成されます。.
血液に関しては、通常、ヒツジ、ウサギ、ウマなどの動物から血液を採取するためにバイオテルミアと接触する必要があります。しかし、これは必ずしも可能ではなく、時には人間の血液が使われます.
血液寒天培地は実験室で調製することができ、またはそれ専用の会社のためにすぐに購入することができる。この培地の調製は最も繊細なものの一つであり、その調製に不注意があると汚染されたバッチになる.
すべての可能な予防措置を講じる必要があるのはこのためです。そして最終的には品質管理は準備される100ごとに37℃1プレートでインキュベートされるべきです.
索引
- 1財団
- 2つの用途
- 2.1血液型の選択
- 2.2寒天の種類の選択
- 2.3調製に使用した基本培地に応じた血液寒天の使用
- 3準備
- 3.1計量して溶かす
- 3.2滅菌する
- 3.3血液の凝集
- 3.4ペトリ皿に注ぐ
- 4参考文献
財団
血液寒天培地は濃縮された、差別的かつ非選択的培地であるという特徴を有することは既に述べた。これらの各プロパティの基盤については、以下で説明します。.
血液寒天培地は、寒天ベースに5〜10％の血液を主な添加物として含むため、濃縮培地です。両方の化合物は多くの栄養素を含んでいます、そしてこの特性はそれの中で培養可能なバクテリアの大部分が成長することを可能にします.
その成長は制限なしに起こります。このため、非選択的です。しかしながら、いくつかの微生物の増殖を妨げ、他の微生物の増殖を促進する化合物がこの培地に添加される場合、それは選択的になる。これは、特定の種類の抗生物質や抗真菌剤が添加されている場合です。.
同様に、血液寒天培地は、β溶血性、α溶血性およびγ溶血性の3種類の細菌を区別することができるので、異なる培地です。.
ベータ溶血剤は、赤血球を溶解または完全に破壊し、コロニーの周囲に明瞭なハローを形成し、β溶血またはβ溶血を生じさせる溶血 - 溶血および微生物をβ溶血といいます。.
β溶血性細菌の例は 化膿連鎖球菌 そして Streptococcus agalactiae.
アルファ溶血剤は、ヘモグロビンがメトヘモグロビンに酸化されてコロニーの周りに緑色がかった色を生成する部分溶血を行うものです。この現象は溶血αまたはα溶血として知られており、細菌はα溶血として分類されます。.
α溶血性細菌の例は 肺炎球菌 そして 連鎖球菌 グループの ビリダン.
最後に、ガンマ溶血性または非溶血性と呼ばれる細菌があります。これらは寒天上で変化を生じることなく成長します、γ-溶血として知られている効果、そして微生物はγ-溶血性です.
γ-溶血性細菌の例：D群の連鎖球菌のいくつかの株（Streptococcus bovisとEnterococcus faecalis）.
用途
血液寒天培地は、微生物学研究室で最も一般的に使用されているものの1つです。.
血液寒天培地上で増殖することができる微生物の中には、厳密な、通性の、微好気性の、嫌気性の、グラム陽性またはグラム陰性の好気性細菌、急速増殖性または低速増殖性細菌がある。.
栄養的観点から要求が厳しいかまたは厄介ないくつかの細菌、ならびに真菌および酵母もまた増殖する。同様に、代謝的に非常に弱い系統を継代培養または再活性化することは有用である。.
ただし、血液型と寒天培地の選択は、回復が疑われる可能性のある微生物およびプラークの使用法（培養または抗生物質）によって異なります。.
血液型の選択
血は子羊、ウサギ、ウマ、人間のいずれでもかまいません.
いくつかの例外を除いて、最も推奨されるのは子羊の血です。例えば、推奨される血液がウマまたはウサギであるヘモフィルス種を分離するために、子羊の血液は第V因子を阻害する酵素を持っているので.
最も推奨されないのは人間ですが、最も利用されているのはおそらくそれが最も入手しやすいからです。.
血液は除細動され、いかなる種類の添加物もなく健康な動物から得られなければなりません。人間の血液を使用するためには、いくつかの要因を考慮する必要があります。
血液が細菌感染症を患ったことがある人から来ている場合、彼らは特異的な抗体を持っているでしょう。これらの条件下では、いくつかの細菌の増殖は阻害される可能性があります。.
それが血液バンクから得られるならば、それはクエン酸塩を含んでいます、そしてそれは特定のバクテリアがその存在下で発達しないことは可能です。一方、血液が抗生物質を服用している患者から来ている場合は、感受性細菌の増殖を抑制することができます.
そしてもし血液が糖尿病の人からのものであれば、過剰なグルコースは溶血パターンの適切な発達を妨げます。.
ベース寒天タイプの選択
血液寒天の調製に使用されるベース寒天は非常に幅広くあり得る。それらの中には、栄養寒天、ブレインハートインフュージョン寒天、トリプチケースソイ寒天、ミューラーヒントン寒天、セイヤーマーティン寒天、コロンビア寒天、ブルセラ寒天、カンピロバクター寒天などがある。.
その調製に使用される基本培地に応じて血液寒天の使用
栄養寒天
このベースは、使用頻度が最も少ないのです。なぜなら、その上には、腸内細菌などの主に要求のない細菌が生育するからです。, シュードモナスsp, 黄色ブドウ球菌、バチルス種, とりわけ。連鎖球菌を分離することはお勧めできません.
ハートブレインインフュージョンアガー（BHI）
それはを含むほとんどの細菌の成長に必要な栄養素を持っているので、それは血液寒天培地の基礎として最も使われているものの一つです。 連鎖球菌sp そして他の要求の厳しいバクテリア。溶血のパターンを観察するのは適切ではありませんが.
子羊の血液は通常、このベースで使用されています.
他の化合物が特定の微生物を単離するために添加される場合、血液寒天変異体もまた調製され得る。例えば、ウサギの血液、シスチンおよびグルコースを補給したブレインハートインフュージョン寒天培地は、単離に役立つ。 Francisella tularensis.
一方、シスチン亜テルル酸塩は、単離に有用です。 コリネバクテリウム・ジフテリア. あなたは人間または子羊の血を使うことができます.
1つ目のベータ溶血は狭いハローのように見えますが、2つ目のハローははるかに広くなります.
同様に、この塩基はバシトラシン、コーンスターチ、ウマの血液および他の濃縮サプリメント（IsoVitaleX）と一緒に、属の単離に使用されます。 ヘモフィルスsp 呼吸器サンプルから.
あなたが抗生物質クロラムフェニコール - ゲンタマイシンまたはペニシリン - ストレプトマイシン - ウマ血液との組み合わせを加えるならば、それはサブローグルコース寒天培地よりも高い収率でさえ、要求の厳しい病原性真菌の単離に理想的です。それはの分離に特に便利です。 Histoplasma capsulatum.
トリップダイズ
このベースは溶血のパターンとオプトキンとバシトラシンの分類群のような診断テストの実行のより良い観察のために最も推薦されます。日常的に使用されているのは古典的な血液寒天培地です。.
この基盤を使うとまたのための特別な血の寒天を準備できます コリネバクテリウム・ジフテリア, テルルシスチン そして 子羊の血.
同様に、この寒天と子羊の血液およびカナマイシン - バンコマイシンとの組み合わせは、特に嫌気性菌の増殖に理想的です。 バクテロイデスsp.
寒天ミューラーヒントン
血液を補給したこのベースは、以下のような要求の厳しい微生物のアンチビオグラムを実行するために使用されます。 連鎖球菌sp.
それはまたのような細菌の分離のために有用です レジオネラ・ニューモフィラ.
寒天セイヤーマーティン
特にナイセリア属が疑われる場合、この培地は血液寒天培地のベースとして理想的です。 髄膜炎菌, 以来 淋病 血液寒天培地では増殖しない.
それはまた感受性テストを行うのに役立ちます 髄膜炎菌.
寒天コロンビア
この基盤はの検索の胃の生検の播種のサンプルのために優秀です ヘリコバクターピロリ.
培地は、抗生物質（バンコマイシン、トリメトプリム、アムホテリシンBおよびセフスロジン）で除繊維した7％子羊の血液を添加して、存在する可能性のある他の種類の細菌の増殖を制限します。.
ヒトまたは子羊の血液、ナリジクス酸およびコリスチンを補給したこれと同じ塩基は、単離に有用です。 ガードネレラ膣. 同じ微生物の抗生物質に対する抗菌薬感受性を評価するのにも理想的です。.
さらに、アミノグリコシドおよびバンコマイシンを添加して、嫌気性菌の培養のための血液寒天の調製に使用されます。.
この基盤は私達が溶血のパターンをきちんと観察することを可能にします.
ブルセラ寒天
血液寒天培地の基礎としてビタミンKの添加と一緒に使用されるこの培地は、嫌気性細菌の培養に理想的です。この場合は子羊血の使用が推奨されます.
カンピロバクター寒天
5％のヒツジ血および5つの抗生物質（セファロチン、アムホテリシンB、トリメトプリム、ポリミキシンBおよびバンコマイシン）を補給したカンピロバクター寒天培地は単離に使用される培地である カンピロバクター・ジェジュニ スツールサンプル中.
準備
各商業家は、パッケージの裏側に培地１リットルを調製するための説明書を持ってくる。対応する計算は、選択されたベース寒天に従って、所望の量を調製するために行うことができます.
計量して溶かす
ベース寒天は脱水状態（粉末）になるので、pH 7.3に調整した蒸留水に溶解する必要があります。.
選択されたベース寒天によって示される量を秤量し、対応する量の水にフィオラ中で溶解させ、次いで適度な温度に加熱し、そして全ての粉末が溶解するまで回転運動で混合する。.
滅菌する
溶解したら、121℃のオートクレーブで20分間滅菌します。.
血液の骨材
オートクレーブを離れるときは、温度が40〜50℃の間で変動するまでフィオラを冷ましてください。ヒトの皮膚が支える温度であり、同時に寒天はまだ固化していない.
このためには、フィオラを手で触れ、熱が許容できる場合は、対応する量の脱繊維血を加えるのが理想的な温度である（寒天１リットル当たり５０ｍｌ）。均質にするために穏やかに混ぜる.
血液の集合体の通過は非常に重要です、なぜならそれが媒体が非常に熱いときに行われるなら赤血球は壊れて、媒体は溶血を観察するのに役立たないでしょうから.
それがあまりにも冷たい追加されるならば、しこりは形成します、そして、メディアの表面はきちんとフルートを作るために滑らかでないでしょう.
ペトリ皿に注ぐ
血液をホモジナイズした直後に滅菌ペトリ皿に入れてください。各ペトリ皿に約20mlを注ぎます。この手順は、層流フード内またはライター付近で行われます。.
シャーレで血液寒天を出すとき、プレートの表面に気泡が残ってはいけません。このような場合、ブンゼンバーナーの炎がプレートをすばやく通過して除去されます。.
プレートを固化させ、使用時までひっくり返して冷蔵庫（２〜８℃）に保存する。血液寒天プレートを使用する前に播種する（それらは室温にしてみましょう）強化する必要があります.
準備されたプレートは約1週間続きます.
参考文献
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