寒天TCBSの基礎、調製および使用



の TCBS寒天 特にVibrio細菌の単離と培養に使用される、高度に選択的で異なる固体培地です。 コレラ菌、V. vulnificus そして V. parahaemolyticus この属の主要な病原体として.

頭字語ＴＣＢＳは、チオ硫酸クエン酸胆汁スクロースを意味する。この寒天はビブリオの選択培地としても知られています。オリジナルの式は中西によって作成され、後で小林によって修正されました.

それは酵母エキス、肉ペプトン、トリプテン、クエン酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、牛胆汁、スクロース、塩化ナトリウム、クエン酸第二鉄、ブロモチモールブルー、チモールブルーおよび寒天からなる。.

この組成物は水、糞便および食品サンプルからのビブリオ種の十分な開発を可能にします。を除いて ビブリオ・ホリサエ, それはこの媒体では成長しません。さらに、ＴＣＢＳ培地は他の付随する細菌、特に大腸菌群の増殖を抑制することができる。.

ビブリオ属のいくつかの種が生み出す深刻な胃腸および腸外の問題のために、それらの診断は非常に重要である。人間は主に生または調理不足の海産物または汚染された水の消費によって感染していますが、創傷の感染によっても感染しています.

このため、臨床検査室では、液体の便サンプルの便培養の研究にTCBS寒天を含める必要があります。特に患者が海水と接触した、または魚介類や魚を消費したと報告した場合.

索引

  • 1財団
  • 2準備
  • 3使用
  • 4シード
  • 5制限
  • 6品質管理
  • 7参考文献

財団

酵母エキス、肉ペプトン、トリプチンがこの培地の栄養源です。しかし、TCBS寒天培地はほとんどの細菌にとって不愉快な培地です。.

その高い選択性は、クエン酸ナトリウムと酸化胆汁酸の添加によって得られます。どちらも抑制剤であり、アルカリ性のpHを培地に与え、付随する植物相の増殖を制限し、そして増殖を促進します。 コレラ菌, 他の種の中で。それは注意する必要があります コレラ菌 胸焼けに非常に敏感です.

その部分については、塩化ナトリウムは浸透圧的に媒体に対してバランスがとれている。さらに、その濃度が高いので、それは阻害剤としても働き、好塩菌の増殖を促進します。.

スクロースは、ブロモチモールとチモールブルーの青いpH指示薬と一緒になって、培地に異なる特徴を与える発酵性の糖です。このため、これにより、スクロース発酵株と非発酵株とを区別することが可能となる。.

スクロース発酵株のコロニーは黄色を発色し、酸の産生により培地を緑色から黄色に変える。非発酵槽は半透明になり、培地は元の色（緑）のままです。.

同様に、この培地は硫黄源としてチオ硫酸ナトリウムおよび顕色剤としてクエン酸第二鉄を含有する。どちらも硫化水素（無色の気体）を産生することができる細菌を示しています。 H2Ｓはチオ硫酸塩から形成され、後にクエン酸第二鉄と反応すると可視の黒色沈殿物が形成する。.

最後に、寒天は培地に固体の粘稠度を与えるものです。.

準備

脱水媒体89 gを量り、1リットルの蒸留水に溶かす。加熱と頻繁な攪拌によって溶解を助けます。混合物は2分間煮ることができます.

この培地はオートクレーブにかけません。それが溶解した後、それは滅菌プレート上に直接供給される。固化するとき、それらはプラークメーカーの中で逆さに配置され、それらが使用されるまで冷蔵庫（２〜８℃）に貯蔵される。.

調製後の培地はpH 8.6±0.2であるべきです.

脱水された媒体の色は薄ベージュか緑がかったベージュであり、媒体の色はフォレストグリーンか青緑色です.

サンプルを蒔く前にプレートを焼き戻したままにしておくことが重要です。.

使用する

ビブリオを分離するための最も一般的なサンプルは下痢便です.

それらが選択培地上にすぐに播種することができない場合便サンプルは、ケアリーブレアの真ん中に輸送する必要があります.

培養液の感受性を高めるために、糞便を濃縮培地としてpH 8.4のペプトン水に最大8時間通過させ、そこからTCBS培地に継代培養する。.

また、ビブリオの一部の株は免疫抑制患者に敗血症を引き起こす可能性があるので、それらは血液培養から単離することができることにも留意しなければならない。同様に、コレラ病の流行がある場合には、海からの水と食物のサンプルを分析することができます。.

播種

研究中のサンプルの接種材料は目立つものでなければならず、播種は枯渇による線条法によって行われる。プレートをエアロビオシス中で３７℃で２４時間インキュベートする。.

の推定植民地 コレラ菌 彼らはスクロースを発酵させるので、それらは中程度の大きさ、滑らかで、不透明で、細い縁と黄色である。.

同様に、 V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi、V. cincinnatiensis、V. furnissii、V. metschnikovii そしていくつか V. vulnificus. として他の臨床的に重要なビブリオ属の種 V. parahaemolyticus スクロースを発酵させず、オリーブグリーンのコロニーとして成長する.

一方、オキシダーゼ（+）であるAeromonasとPlesiomonasのいくつかの菌株は、この培地で増殖し、臨床医を混乱させる可能性がある黄色のコロニーを形成する可能性があることに留意する必要があります。 Pseudomonasのいくつかの菌株もオキシダーゼ（+）が緑色のコロニーとして増殖する V. parahaemolyticus.

制限

ビブリオ属に陽性のオキシダーゼ試験は、得られた結果が偽陰性になるので、決してTCBS寒天から得たコロニーから行うべきではない。この試験では、培地中の化合物が強く干渉します。したがって、それは血液寒天培地上の継代培養から行われるべきです.

品質管理

培地が良好な状態にあることを証明するために、既知または認証された対照株を植えて、成長が予想される特性を満たすかどうかを観察することをお勧めします.

このために、の株：

-コレラ菌 - 満足のいく成長（黄色のコロニー、半透明の境界線）.

-腸炎ビブリオ - 満足のいく成長（緑色の中心と半透明の境界を持つコロニー）.

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - 十分な成長（コロニーの周りに同じ色のハローを持つ黄色のコロニー）.

-エンテロコッカス・フェカリス ATCC 29212 - 全体的または部分的な阻害（小さな黄色または半透明のコロニー）.

-緑膿菌 ATCC 27853-部分的または全体的な阻害（青いコロニー）.

-大腸菌 ATCC 25922 - 完全に禁止されています.

-プロテウスミラビリス ATCC 43071 - 全体的または部分的阻害。 （小さなコロニーの中央に緑色の半透明の縁）.

接種されていない培地のインキュベーションは変更してはいけません.

参考文献

  1. ディフコフランシスコソリアメルギゾラボラトリーズ。 TCBS寒天。 2009年に入手可能：f-soria.es
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