寒天Thayer Martinの基礎、準備および使用



の セイヤーマーティン寒天 それはのための非常に栄養価が高くそして選択的な固体媒体です Neisseria meningitidisおよびNeisseria gonorrhoeae。 どちらも病原性または臨床的に重要なナイセリアとして知られています.

Thayer Martin寒天の最も重要な特別な機能の1つは栄養補助食品のその高い含有量です。 Neisseriasは栄養の観点から非常に要求の厳しい微生物であり、したがって一般的な培地では増殖しないため、この特性は不可欠です。.

一方、これらの微生物は通常、非無菌領域に見られるため、ナイセリア属の発生に影響を与えることなく、付随するフローラの増殖を妨げる阻害剤の添加が必要である。.

この寒天培地は、GCベースの寒天培地、ヘモグロビン、追加の栄養補助食品、および抑制性物質（抗生物質と抗真菌剤）の複合体から構成されています。商業住宅はそれぞれのサプリメントを別々に販売しています.

この培地に植えるサンプルは、探している微生物によって異なります。に ナイセリア 淋病 理想的なサンプルは膣分泌物と尿道分泌物です。の間 髄膜炎菌 最も使用されているサンプルは、CSF、咽頭および鼻咽頭滲出液です。.

索引

  • 1財団
    • 1.1 GCベース寒天
    • 1.2ヘモグロビン
    • 1.3強化サプリメント
    • 1.4抑制剤
  • 2準備
    • 2.1オリジナルThayer Martin Agar
    • 2.2寒天Thayerマーティンの修正
  • 3使用
  • 4品質管理
  • 5制限
  • 6参考文献

財団

ナイセリア属菌は、厄介な微生物として分類されているため、それらの単離は困難です。このため、ThayerMartínは複雑な媒体であり、その各コンポーネントは以下で説明される機能を果たします。

GCコア寒天

GC寒天は、プロテオースペプトン、コーンスターチ、塩化ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウムおよび寒天を含みます。その成分は、微生物開発のための基本的な栄養素を提供して、有毒な脂肪酸を中和して、浸透バランスを維持して、pHを定義して、そして環境に堅実な一貫性を提供するのに貢献します.

ヘモグロビン

ヘモグロビンは、第Ｖ因子および第Ｘ因子（それぞれニコチンアミドアデニンジヌクレオチドＮＡＤおよびヘミン）を提供する。したがって、この環境では、ヘモフィルス種も成長します。ヘモグロビンは、脱水形態で市販されているか、または新鮮な脱フィブリン化ウシ血液を培地に添加することができる。.

強化サプリメント

一方、ベース寒天培地に含まれる栄養素はナイセリア属の要件を満たすのに十分ではないため、濃縮サプリメントをThayer-Martin培地に添加する必要があります。.

最も一般的に使用されている強化サプリメントはisovitalexと呼ばれています。それはグルタミン、アデニン、NAD、コカルボキシラーゼ、グアニン、硝酸第二鉄、p-アミノ安息香酸、ビタミンB 12、チアミンおよびグルコースを含んでいます。これらの化合物はすべて、病原性ナイセリアの適切な発達に必要です。.

阻害剤

それは非常に栄養価の高い培地であるため、その地域の通常の植物相の微生物の増殖を防ぎ、したがってナイセリア属の単離を促進するために阻害剤を使用しなければならない。.

阻害剤複合体は、バンコマイシン、コリスチンおよびナイスタチンからなる。バンコマイシンはグラム陽性菌の増殖を抑制し、コリスチンはPseudomonasや一部の腐生性ナイセリア菌などのグラム陰性菌の増殖を抑制し、ナイスタチンは酵母に作用します。 カンジダ・アルビカンス.

しかし、その後、Thayer Martin寒天培地が改良されました。変化はトリメトプリムの添加、寒天の量の増加および追加のグルコースの添加からなった。これらの変更は大幅にの種の回復を改善しました 淋菌.

トリメトプリムはプロテウス属の増殖およびその結果として生じる群れ形成を阻害することに留意すべきである。この意味では、抗生物質はミディアムに選択的な性質を提供するものですThayer Martin.

準備

オリジナルセイヤーマーティンアガー

-GC寒天

脱水GC培地8.2 gを量り、100 mlに懸濁する。頻繁に攪拌しながら１分間混合して煮沸して全体を溶解させる。混合物をオートクレーブで121℃で15分間滅菌する.

-2％ヘモグロビン

脱水ヘモグロビン2 gを熱蒸留水2または3 mlに懸濁して、均一な混合物を形成します。水を少しずつ加えて100mlの容量にする。懸濁液は殺菌する前に均質でなければなりません.

オートクレーブで15分間滅菌する.

-強化サプリメント

同じ商業住宅から提供された希釈剤で商業道路を再構成します。よく混ぜる。使用される希釈剤の量はキットの説明書に明記されている。.

-抑制サプリメントV.C.N（バンコマイシン、コリスチン、ナイスタチン）

バイアルを商業用ハウスから提供された希釈剤で再構成します。よく混ぜる。使用される希釈剤の量はキットの説明書に明記されている。.

-準備済み

GC寒天100 mlごとに、次の手順に従います。

GC寒天がオートクレーブから出たら、約50℃の温度に冷却し、2 mlの調製ヘモグロビン溶液、2 mlの濃縮サプリメント（イソビタレックスまたはブリタレックス）、および2 mlの抑制サプリメントを加えます。滅菌ペトリ皿に入れて出す.

固化させて使用するまで冷蔵庫に保存する.

調製した培地の色はチェリーレッドです。培地の最終ｐＨは７．２±０．２である。

改良セイヤーマーティン寒天培地

脱水GC培地8.2 gを量り、100 mlに懸濁する。寒天1 gを加え、グルコース0.3 gを加える。頻繁に攪拌しながら１分間混合して煮沸して全体を溶解させる。混合物をオートクレーブで121℃で15分間滅菌する.

上記のようにヘモグロビンと濃縮サプリメントを準備する.

使用される抑制サプリメントは、Ｖ．Ｃ．Ｎ．Ｔ（バンコマイシン、コリスチン、ナイスタチン、トリメトプリム）である。.

-準備済み

オリジナルのThayer Martin寒天培地の説明に従って進めてください.

使用する

サンプルを蒔く前に、Thayer Martin寒天培地を温めてください。一般的に使用されるサンプルは、咽頭滲出液、鼻滲出液、膣分泌物、尿道分泌物および／または直腸分泌物、ならびにＣＳＦである。.

新たに採取したサンプルを使用し、寒天上に強い接種材料を作ります。サンプルは材料排出によって直接播種され、次に表面の枯渇によって線条化されます.

プレートを微好気性ジャー（５％ＣＯ ２）中で３５〜３７℃で２４〜４８時間インキュベートする。2）インキュベーション期間の終わりに、プレートを、小さい、灰色の、そして時にはムコイド様のコロニーについて調べる。.

疑わしいコロニーに対するグラムおよび確認生化学検査の実施.

品質管理

Thayer Martin寒天培地の品質管理を行うために、以下の微生物株を使用することができます。.

淋菌 ATCC 49226と 髄膜炎菌 ATCC 13090;両方の株において満足のいく開発が期待される。.

以下の菌株も含まれるべきです： 表皮ブドウ球菌 ATCC 14990, 大腸菌 ATCC 25922, プロテウスミラビリス ATCC 43071と カンジダ・アルビカンス これらの全てにおいて、この培地において全体的または部分的な阻害が予想される。.

制限事項

-使用される阻害剤に耐性のある細菌は培地中で増殖する可能性があることに留意しなければならない。.

-の株があります ナイセリア 淋病 使用されるバンコマイシンの濃度に敏感かもしれません。このため、イソビタレックスを添加したチョコレート寒天を並行して使用することをお勧めします。ただし、インヒビターは使用しないでください。.

-この培地で増殖し、病原性ナイセリア、特に淋菌の分離を妨げることがあるナイスタチンに耐性のある酵母株があります。.

参考文献

  1. バルテック診断研究所寒天Thayer-Martin.2016。利用可能な場所：com
  2. 研究所ブリタニア。セイヤーマーティンモディファイドミディアム。 2010年から入手可能：britanialab.com
  3. ウィキペディアの貢献者。 Thayer-Martin寒天培地。ウィキペディア、フリー百科事典。 2017年10月26日16時33分UTC。 wikipedia.org4から入手できます。 2019年2月28日アクセス.
  4. 研究所ブリタニア。 GC寒天。 2010年から入手可能：britanialab.com.
  5. 悪質な微生物のためのLaboratories BBL™培地濃縮。 1999年に入手可能：bd.com
  6. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.