寒天TSIの基礎、準備および使用



の TSI寒天 または鉄の三糖寒天培地はグラム陰性桿菌の最初の同定を導く生化学的試験として役立つ固体培地です。それは存在する糖の発酵、および硫化水素とガスの生産を証明することに基づいています.

その組成と基礎はクリグラー鉄テストと非常に似ていますが、後者はグルコースとラクトースのみを含んでいるという違いがあります。その代わりに、その名が示すように、三重鉄鉄は三つの発酵性炭水化物を含んでいます：グルコース、ラクトースおよびスクロース。.

さらに、TSI培地には、非常に栄養価の高い寒天培地となる4つのタンパク質誘導体、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、プロテオースペプトンが含まれています。硫酸第一鉄アンモニウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、フェノールレッド、寒天も含まれています。.

微生物が培地中に存在するグルコースを発酵することができないことは、それが腸内細菌科に属することから直ちに除外される。したがって、この検定は属と種を決定するためにどの識別経路をとるべきかを決定するために不可欠です。.

各実験室は、それがTSI寒天培地またはKligler寒天培地のどちらで機能するかを決定します.

索引

  • 1財団
    • 1.1塩化ナトリウムと寒天
    • 1.2 pH指示薬（フェノールレッド）
    • 1.3タンパク質誘導体（酵母エキス、肉エキス、ペプトン、プロテオースペプトン）
    • 1.4炭水化物（グルコース、ラクトース、スクロース）の発酵
    • 1.5ガス生産
    • 1.6チオ硫酸ナトリウムと硫酸第一鉄アンモニウム（硫化水素の製造）
  • 2準備
  • 3つの用途
  • 4シード
  • 5制限
  • 6参考文献

財団

各化合物は培地内で機能を果たします。.

塩化ナトリウムと寒天

塩化ナトリウムは、媒体の浸透平衡を維持するために必要です。寒天は固体の一貫性を与えますが.

PH指示薬（フェノールレッド）

調製された培地のｐＨは７．３にバランスされ、そしてｐＨ指示薬（フェノールレッド）は６．８未満で黄色に変わる。これは、糖の発酵によって生成された少量の酸が培地を赤橙色から黄色に変えることを意味します。.

発酵が起こらなければ、ペプトンの使用による培地のアルカリ化が起こり、赤橙色から濃い赤へと変わります。.

タンパク質誘導体（酵母エキス、肉エキス、ペプトン、プロテオースペプトン）

細菌がＴＳＩ寒天中に存在するタンパク質を代謝すると、反応が酸素を必要とするので、培地をアルカリ化するアミンが生成される（主に斜面レベルで）。アミンがベゼルを強い赤に変える.

しかし、これは炭水化物を発酵するかどうかにかかわらず細菌の能力に依存します.

炭水化物の発酵（グルコース、ラクトース、スクロース）

糖の発酵の研究はいくつかの画像を与えることができ、それぞれは異なって解釈されます。テストの解釈は、微生物を3つのカテゴリーに分けます：非グルコース発酵槽、非ラクトース発酵槽およびラクトース/スクロース発酵槽.

培地中のグルコースの量は限られているが、ラクトースとスクロースの濃度は10倍高いことに注意すべきである。.

それがエネルギーのための最も簡単な炭水化物であるので、腸内細菌科の細菌および他のグルコース発酵微生物はこの糖を発酵し始めるでしょう。.

一方、ラクトースとスクロースは複雑な炭水化物であり、それらはエンブデン - マイヤーホフサイクルに入ることができるように分解されそしてグルコースに変換されなければならない。.

-非発酵グルコース微生物

接種された微生物がグルコースを発酵することができないとき、はるかに少ないが他の炭水化物を発酵することができません。したがって、ここでは酸は形成されませんが、ペプトンの使用によりベベル部にアミンが形成されます。.

この場合、ベベルはより強い赤に変わり、チューブの底部は変化しないままか、アルカリ化されて、赤いチューブ全体を残すことができます。.

解釈：K / Kは、アルカリベベル/アルカリまたは中性バックグラウンドを意味します

記事の冒頭にある画像でチューブDの画像を参照してください.

この結果は、微生物が腸内細菌科に属していないことを示しています.

-ラクトース/スクロースの非発酵微生物

バクテリアがグルコースを発酵させることができるがラクトースまたはスクロースを発酵させることができないならば、以下は起こります：

細菌は約6〜8時間後に存在するすべてのグルコースを消費し、ベベルとタコスの両方を酸性化することができます。つまり、寒天は完全に黄色に変わっているでしょう。しかし、グルコースが枯渇してラクトースとスクロースを使用できなくなると、バクテリアはタンパク質の代謝を始めます。.

この反応は酸素を必要とし、それ故ペプトンの劣化は表面（ベベル）で起こる。生成されたアミンは黄色から赤色に変わることでベゼルをアルカリ化します。この反応は、インキュベーションの18〜24時間後に証明されます.

解釈：K / Aは、アルカリベベルとアシッドタコスを意味します.

記事の冒頭にある画像でチューブBの画像を参照してください.

-ラクトース/スクロース発酵微生物

明らかに、ラクトースおよびスクロースを発酵することができる微生物はグルコースを発酵することができる。培地中に存在する最小量のグルコースが使い果たされた後、形成されたピルビン酸塩はクレブスの好気性サイクルを通して代謝し始めて酸を形成し、そして８〜１２時間の間に全ての培地は黄色になるであろう。.

バクテリアがラクトースまたはスクロースを分解することができるならば、酸は作り出され続けます、そして、18から24時間後に全体の管 - くちばしとタコス - は黄色のままです.

グルコースの使用は2つの方法で行われることに注意する必要があります。1つはチューブの斜面で好気性の形態で、もう1つはチューブの底で嫌気的に.

解釈：A / Aは酸面取り/酸底を意味します。それはガスを提示するかどうか.

記事の冒頭にある画像でチューブAの画像を参照してください.

ガス生産

いくつかの微生物は糖の発酵中にガスを生成することができる。ガスは寒天の内側にかかる圧力によって管の中で証明されます。圧力は泡の形成や寒天の移動を引き起こします。時々ガス形成は媒体を破壊できます.

TSI培地を播種するときに、それが底に達するまで寒天の中心できれいに作られていることが重要です。パンクがチューブの壁に向かって方向を変えられると、それは誤って形成されたチャネルを通って逃げるので、それはガスの生産において誤ったポジティブを引き起こす可能性がある。.

寒天斜面で起こる反応と同様にガスの生産は酸素を必要とします、それ故にそれは綿の栓で管を覆うことを推奨します、そして、ベークライトのふたが使われるならば、それは完全に調整されるべきではありません.

ガス生産量はプラス（+）またはマイナス（ - ）として報告される.

チオ硫酸ナトリウムと硫酸第一鉄アンモニウム （硫化水素の製造

硫化水素（無色のガス）を生成することができる細菌は、培地に存在するチオ硫酸ナトリウムの硫黄を取ります。 Hが形成されたら2Sは硫酸第一鉄アンモニウムと反応して硫化鉄を生成します（黒い沈殿がはっきりと見えます）。.

Hの生産2Sは正（+）または負（ - ）として報告されます.

記事の冒頭にある画像でチューブCの画像を参照してください.

準備

脱水三糖糖（TSI）寒天62.5グラムを量り、蒸留水1リットルに溶かす.

寒天が完全に溶けるまで加熱します。頻繁に攪拌しながら1分間煮る。蓋付きの13/100試験管に4 mlの培地を分注する.

オートクレーブで121℃で15分間滅菌する。オートクレーブから取り出し、傾斜した方法で休ませてください。ベースとベゼルの両方が同じ距離になるように注意する必要があります。.

2〜8℃の冷蔵庫に保管する菌株を植える前に和らげる.

脱水培地の色はライトベージュであり、調製培地は赤橙色である。

調製培地の最終ｐＨは７．３±０．２である。.

用途

TSIテストは、微生物検査室のレベルで広く使用されています。この試験は、属および種の同定に到達するために適用しなければならない試験の種類を導くために不可欠です。その良い実行と解釈は材料と仕事を節約することができます.

結果がＴＳＩ Ｋ ／ Ｋであり、シトクロムオキシダーゼ試験が陽性である場合、他の属の中でも、シュードモナス属、アルカリゲン属、アクロモバクター属、バークホルデリア属などの非発酵グラム陰性桿菌の同定に試験を使用すべきである。それが陰性オキシダーゼである場合、それはアシネトバクター属、ステノトロフォモナス属などに向けられる。.

一方、TSI A / AまたはK / Aが得られ、チトクロームオキシダーゼ試験が陰性であれば、より多くの硝酸塩が亜硝酸塩に還元されるので、我々はこれが腸内細菌科に属する微生物であることを確実にするであろう。この場合、識別ルートは、このグループの細菌に対する特定のテストに向けられます。.

一方、K / AまたはA / A画像が得られ、チトクロームオキシダーゼ試験が陽性である場合、追加される試験は腸内細菌科に属さない発酵菌株の同定に向けられる。プレシオモナス、ビブリオ、パスツレラ.

硫化水素、ネガティブオキシダーゼを用いたTSIは、腸内細菌科の次の属の同定を導くであろう：プロテウス、シトロバクター、エドワジエラ, Leminorella、Pragia、TrabusiellaまたはSalmonella.

アルカリ性底部および陽性オキシダーゼを有するアルカリ性斜面に乏しいまたは中程度の硫化水素を有するTSIは、Hを産生するグラム陰性非発酵桿菌の同定のための試験の使用を導くであろう。2Sなど シェワネラ・プトレファシエンス.

最後に、TSIはグラム陽性菌における硫化水素の生産の調査、特に疑わしい場合に使用することができます。 Erysipelothrix rhusiopathiae.

播種

TSI培地には、初代培養または選択培養で分離された純粋なコロニーを接種する必要があります。コロニーが混合フローラのサンプルを播種された選択培地から採取される場合、コロニーの下部にはその培地で阻害された生存可能な株があるかもしれないので、表面のみを採取するように注意するべきである。.

したがって、ループを選択培地で冷却してコロニーを採取し、TSI培地に接種することは絶対に避けてください。.

植え付けはまっすぐな輪か針でされます。それが底に達するまでそれが真ん中の中心を通り抜けていることに注意しながら穿刺がなされ、それから植え付けはジグザグの方法で表面への接種が終了します。 2回穿刺しないでください.

エアロビシスで37℃で18〜24時間インキュベートする。現時点では解釈されない.

制限事項

TSIテストはインキュベーションの18から24時間の間に読まれるべきです。この時間より前に測定を行うと、発酵A / Aが誤検知される可能性があります。一方、この時間以降の読書は、培地をアルカリ化するペプトンの消費のために、非発酵槽の偽陰性画像を生じさせる可能性があります。.

参考文献

  1. Ｍａｃ Ｆａｄｄｉｎ Ｊ．（２００３）。臨床的に重要な細菌の同定のための生化学的試験第3版社説Panamericanaブエノスアイレスアルゼンチン.
  2. Forbes B、Sahm D、Weissfeld A.（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  3. Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断第5版社説Panamericana S.A.アルゼンチン.
  4. 「TSI寒天」 ウィキペディア、フリー百科事典. UTC：2017年7月10日、08：09。 2019年2月10日、03時33分利用可能：en.wikipedia.org
  5. 研究所ブリタニア。 TSI寒天（トリプルシュガーアイロン寒天）。 2015年に入手可能：britanialab.com
  6. BDラボラトリーズトリプルシュガーアイロン寒天（TSI寒天）。 2003年から入手可能：bd.com