ECブロスの基礎、調製および使用



の ECブロス またはスープ 大腸菌 それは選択的液体培地です。この培地は、含まれる主な薬剤が 大腸菌.

ＥＣブロスは、トリプテン、ラクトース、胆汁酸塩、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、塩化ナトリウムおよび水からなる。その方式は戦略的に全および糞便性大腸菌群の増殖を促進し、他の付随微生物の発生を防ぐように設計されています.

バクテリア 大腸菌 重要な胃腸の影響を引き起こす、水や食物源の汚染物質として存在する主な糞便性大腸菌.

それはの多くの血清型があることに注意すべきです。 大腸菌。 それらの中で我々は、腸管出血性（EHEC）、腸管浸潤性（EIEC）、腸管病原性（EPEC）、腸管毒素原性（ETEC）および腸凝集性（EAEC）を挙げることができる。.

この手段は、それらを区別することができずに、それらすべての開発を可能にする能力を持っています。これを行うには、追加のテストを実行する必要があります.

総および糞便性大腸菌群の検索のための最確数（NMP）による水と食物の微生物学的研究は、いくつかの段階によって確認されるプロトコルです。推定段階、確認段階および完了段階。 ECブロスは確認段階で使用されます.

索引

  • 1財団
    • 1.1 ECブロス
    • ノボビオシンで修飾した1.2 ECブロス
  • 2準備
    • 2.1 ECブロス
    • 2.2ノボビオシンで修飾したECブロス
  • 3使用
    • 3.1全大腸菌および糞便性大腸菌の分析
  • 4品質管理
  • 5おすすめ
  • 6参考文献

財団

ECブロス

EC培地は、細菌が含まれている場合に、全大腸菌および糞便大腸菌の最適な発生に必要な栄養素を提供することに基づいています。 大腸菌.

これらの栄養素はトリプテンによって提供され、ペプチドとアミノ酸の優れた供給源です。さらに、それはまたラクトース、エネルギーを提供し、バクテリアがガスを生産するかどうか示すことを可能にする発酵性炭水化物を含みます.

他方、培地は、サンプル中に存在し得るグラム陽性微生物の増殖を阻害するので、選択的性質を提供する胆汁酸塩を含有する。.

同様に、リン酸二カリウムおよびリン酸一カリウムもｐＨバランス系として作用する。ブロスに含まれるラクトースは、微生物によって発酵されるときに培地を酸性化する傾向があるため、このシステムが必要ですが、これはリン酸塩によって補われます.

したがって、制御できない酸性度が求められている微生物の適切な発育に影響を与える可能性があるため、これらの要素は不可欠です。.

その一部として、塩化ナトリウムは媒体を浸透圧的に安定化し、水は存在する溶質の溶媒であり、媒体に液体の粘稠度を提供する。.

ノボビオシンで修飾したECブロス

OkrendとRoseは、ノボビオシンで修飾したECブロスと呼ばれるさまざまなECブロスを作成しました。修飾は、胆汁酸塩濃度の低下および20 mg / dlのノボビオシンの添加からなる。.

この変更はのひずみの回復を支持します 大腸菌 腸管出血（O157：H7）.

この細菌性血清型は、溶血性尿毒症症候群（HUS）を引き起こす可能性がある重度の出血性大腸炎を引き起こします。これは急性腎不全を引き起こす可能性があり、高齢者の死亡率は最大50％に達する可能性があります。.

汚染された食物の消費によりこの細菌によって毎年引き起こされる罹患率および死亡率のために、米国農務省（USDA）は広くこの手段の使用を推奨している。.

準備

ECブロス

脱水媒体37.4グラムを量り、1リットルの蒸留水に溶かす。混合物を５分間静置する。その後、熱源の中で、よく溶けます.

一旦溶解すると、それは予めDurhamチューブで調整された試験管に分配される。オートクレーブで121℃で15分間滅菌する.

培地のpHは6.9±0.2であるべきです。脱水された媒体の色はベージュ色で、薄琥珀色が用意されています。.

ワインは使用されるまで冷蔵庫に保管されています。使用時には、ブロスは室温でなければなりません。.

一方、ECブロスは2倍濃度でも調製できます。.

ノボビオシンで修飾したECブロス

脱水媒体36.7グラムを量り、1リットルの水に溶かす。残りの調製は上記のものと同じである。.

使用する

総および糞便性大腸菌群の分析

ECブロスは、医薬品や食品のように、水試料中のNMP法による大腸菌群の研究の確認段階に理想的です。.

推定段階で得られた濁った濁ったガス生産ブロスは、2％の明るい緑色の胆汁とECブロスに再播種する必要があります。.

全大腸菌群については、ＥＣブロスを３７℃で２４〜４８時間エアロビオシス中でインキュベートし、そして糞便性大腸菌群については４４℃で２４〜４８時間エアロビシス中でインキュベートする。.

両方の場合において、それは以下のように解釈される：ガス生成を伴う混濁管はポジティブと考えられる。 24時間以内にガスが発生しなければ、インキュベーションは48時間まで続けられます。.

EC陽性ブロスは完全確認段階に進み、これはMac Conkey寒天、EMB寒天またはEndo寒天のような選択培地に再播種することからなる。.

使用するブロスがノボビオシンでEC修飾されている場合、ポジティブチューブはソルビトールを含むMac Conkey寒天上に播種することをお勧めします。.

品質管理

品質管理は、調製培地のバッチごとに実施しなければなりません。まず、培地の無菌性を評価する必要があります。この意味では、１つまたは２つのブロスを、好気性菌に接種せずに３７℃で２４時間インキュベートする。期待される結果は、濁度または色の変化のない、透明なブロスです。.

次に、既知の株の増殖を評価する必要があります。そのためには、次の細菌を使用できます。 大腸菌, ATCC 8739, 大腸菌 ATCC 25922, ネズミチフス菌 ATCC 14028.

全ての場合において、満足のいく微生物の発生が予想され、ガス生産を伴う混濁ブロスを観察する。 大腸菌 サルモネラ菌用ガスなし.

コントロールに含めることができる他の株は以下のとおりです。 黄色ブドウ球菌 ATCC 25923, エンテロコッカス・フェカリス ATCC29212。これらの菌株は完全に阻害されなければならない.

おすすめ

-ダーラム管の配置は大腸菌群の研究に必須である.

-滅菌する前に試験管に培地を分配します。.

-培地に3ヶ月以上の準備がある場合は使用しないでください.

-培地の通常の特性に変化がある場合は使用しないでください.

参考文献

  1. 研究所ブリタニア。 ECミディアム。 2015年に入手可能：britanialab.com
  2. 大腸菌 腸管出血。食料安全保障および公衆衛生センター。 2010年に入手可能：cfsph.iastate.edu
  3. ネオゲン株式会社ミディアムEC。 Foodafety.neogen.comで入手可能です。
  4. ネオゲンノボビオシンで修飾した培地EC。 Foodafety.neogen.comで入手可能です。
  5. Jure M、CondoríS、Leotta G、Chinen I、Miliwebsky E、Allori C、Aulet O、Castillo M. 大腸菌 トゥクマン州コンセプシオンの精肉店からの新鮮な牛挽肉から志賀毒素の生産者. ArgによるRev Microgol。 ２０１０，４２（４）：２８４〜２８７。 www.scielo.orgから入手できます。.