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キンウン染色の基礎と技法
の きんうん染色 それは抗酸菌や酸性寄生虫を染色するために使用される着色技術です。それはZiehl-Neelsenのカラーリングの変更から生まれました。両方の手法は同じように解釈されますが、2つの要素が異なります。主な試薬の調製とKinyoun手法は熱を使用しないという点です。.
このため、それは低温修飾Ziehl-NeelsenまたはKinyoun低温染色としても知られています。の着色に表示されます 結核菌, Mycobacterium leprae, 非定型抗酸菌, ノカルジア属sp, Cryptosporidium parvum、Cryptosporidium meleagridis、Cryptosporidium felis、Cryptosporidium muris そして Cyclosporas cayetanensis.
それはそれらが部分的に耐酸性アルコールであるので、ノカルジアスはこの技術で弱く染まることを言及する価値があります、それでこのジャンルのために方法論の修正があります.
次に、コクイディアの検出のために、KinyounコールドテクニックとDidierによって修正された3色テクニックを組み合わせました（Cryptosporidium parvum e Isospora belli）および微胞子虫の胞子（腸内毒素 そして 腸炎脳症）.
索引
- 1財団
- 2テクニック
- 2.1材料
- 2.2キンウンフェネティックフクシンの調製
- 2.3アルコール酸の調製
- 2.4メチレンブルー造影剤の調製
- 2.5きんうん染色法
- 2.6ノカルジアのための特別なキン名詞テクニック
- 2.7 Didierによって修飾されたフェノール性と三色性フクシンの複合技術
- 2.8品質管理
- Ziehl法と比較した3 Kinyoun法-Neelsen
- 4参考
財団
主な染色試薬は、マイコバクテリアの脂質（ミコール酸）およびある種の寄生虫に富む、蝋様細胞壁内に存在するカルボン酸に結合するという性質を有する、カルボルフクシンまたはフクシンフェニカダである。.
その組合は酸の脱色によって対抗されない。したがって、微生物は耐酸性アルコールとして定義されています.
熱を介して染料を固定するZiehl-Neelsen技術とは異なり、この技術のために調製されたフェノールフクシン溶液は高濃度のフェノールを含むので、Kinyoun技術ではこの工程は必要ではない。.
フェノールは細胞壁の脂質物質を溶解し、それがカルボフルフシン染料の侵入を可能にする。染料が浸透した後、それはアルコール酸で洗浄しても固定されたままになります.
このようにして、耐酸性微生物は特徴的な赤い色を帯びますが、耐酸性アルコールではないものはすべて変色して青く染まります。.
テクニック
材料
- 修飾フェノールフクシン.
- アルコール酸.
- メチレンブルー.
キンウンフェンテーションフクシンの調製
- 基本フクシン：4グラム.
- フェノール：8ml.
- アルコール（95％）：20ml.
- 蒸留水：100ミリリットル.
アルコール中の塩基性フクシンはゆっくり溶解し、絶えず混合しなければなりません。続いて、結晶化したフェノールを５６℃の水浴中で溶融する。溶解したら、上で調製したフクシン溶液に８ｍｌを加える。.
アルコール酸の調製
- 濃塩酸：3ml.
- エタノール（95％）：97ml.
それは測定され、結合されそして混合されなければならない.
メチレンブルー造影剤の調製
- メチレンブルー：０．３ｇ.
- 蒸留水：100ミリリットル.
計量して溶かす.
きんうん染色法
1 - サンプルから直接塗抹標本を準備します。これは、とりわけ、痰、肺液、尿沈渣、脳脊髄液、または糞便です。あるいは初代培養培地で開発された純粋なコロニーから得られた微生物の懸濁液から.
2-塗抹標本を熱で固定する.
3-塗抹標本を着色の橋の上に置き、準備したKinyounのフェノール系フクシン試薬で覆う。それを3、5分座ってみましょう.
4-蒸留水で洗う.
5-酸性アルコールで3分間漂白し、蒸留水で再度洗う.
6-それ以上染料が引っ張られなくなるまで1または2分間酸性アルコールで再度漂白する.
７－蒸留水で洗浄し、スライドを直立位置にして排水する。.
８－調製物をメチレンブルーで覆い、そして４分間放置する。.
9-蒸留水で洗って風乾させる.
10 - 40倍、100倍で調べる.
耐酸性微生物の染色を改善し、促進したい場合は、30または40 mlのKinyounのフェノール系フクシンに1滴の湿潤剤（tergitol No. 7など）を加えます。.
いくつかの研究室はメチレンブルーのコントラスト染料を明るい緑色またはピクリン酸に変える。最初のものは背景を緑色にし、2番目のものは黄色を生成します.
ノカルジアのための特別なキンウンテクニック
ノカルジア属細菌の染色を改善するために、キンウン染色の変法が用いられる。手法は次のとおりです。
1-キムーンフェンシングされたフクシンで塗抹標本を3分間覆う.
2-蒸留水で洗う.
３－染料が混入しなくなるまで、３％調製酸アルコールで簡単に漂白する。.
4-蒸留水でもう一度洗う.
5-調製物をメチレンブルーで覆い、30秒間放置する。.
6-蒸留水で洗って風乾させる.
Didierによって修飾されたフェノール性と三色性フクシンの複合技術
この技術はコクシジウムや胞子の検索で便検体の分析に推奨されます Microsporidium sp 同時に従うべき手順は次のとおりです。
1-キンウンフェノールフクシンで塗抹標本を10分間覆う.
2-染料を取り除き、蒸留水で洗う.
3-アルコール塩酸で30秒間漂白.
4-蒸留水でもう一度洗う.
5-塗抹標本を37℃で30分間三色溶液で覆う。.
6-蒸留水で洗う.
7-アルコール酢酸で10秒間脱色する.
8- 95％エタノールを用いて塗抹標本を30秒間洗浄する。.
品質管理
ポジティブコントロールとして、塗抹標本は 結核菌 そして準備された試薬で染色してバクテリアが正しい色をしていることを確認する（赤フクシア）.
ネガティブコントロールは、耐酸性アルコールではない任意の菌株で塗抹標本を作成し、サンプル全体がコントラストの色になることを確認することによっても使用できます。.
キンユーン法とジール法の比較 - ニールセン
Kinyounのテクニックは、加熱のステップを排除するのでより簡単ですが、その主な利点は、毒性の高い、長期にわたるガンの原因となる蒸気の放出を防ぐことです。したがって、Kinyoun染色は染色要員にとってより安全です。.
試薬は腐食性で漂白剤は可燃性であるため、試薬が皮膚に直接接触しないように注意する必要があることを考慮に入れることが重要です。.
不利な点に関して、ネガティブスミアは必ずしも微生物が存在しないことを示すわけではありません。加えて、細胞破砕物の存在は偽陽性を引き起こす可能性があり、それは診断において混乱を引き起こす。.
参照
- 応用臨床化学（2016） BK Kinyoun Kit。で入手可能：cromakit.es
- オロスコ - リコ・ミゲル。キンウン染色とHIVにおける2つのコクシジウム医学雑誌MD。 2011年3（2）：137
- フォーブスB、サームD、ヴァイスフェルトA（2009）。ベイリー＆スコットの微生物学的診断12編アルゼンチンパナメリカーナS.A.
- Koneman E、Allen S、Janda W、Schreckenberger P、Winn W（2004）。微生物学的診断（第5版）。アルゼンチン、編集Panamericana S.A..
- ウィキペディアの貢献者。 「きんうん汚れ」 ウィキペディア、フリー百科事典. ウィキペディア、フリー百科事典、2018年2月8日。ウェブ。 2019年1月5日.
- Combol A、FernándezN、Figueredo E、AcuñaA、Zanetta E. CoccidiaとMicrosporidiaの同時診断のための着色技術の実装。共和国大学衛生研究所。モンテビデオウルグアイから入手可能：higiene.edu.uy