MayGrünwald-Giemsaによる汚れ、テクニックと用途



の 5月Grünwald-Giemsaしみ o PappenheimはGiemsaとMayGrünwaldの試薬を混合したディファレンシャルカラーリング技術です。これは、末梢血および骨髄の塗抹標本における正常および異常な血球の識別、ならびに組織学的切片および細胞学的サンプルの染色に使用されます。.

両方の試薬 - GemsaとMayGrünwald - は、Romanowskyタイプの染色、酸性染料と塩基性染料の組み合わせに基づく技術から派生しています。.

ギムザは、エオシン、メチレンブルーおよびその誘導体とグリセロールとの混合物を安定化させることによって技術を改善した。対照的に、MayGrünwaldは、溶媒としてメタノールを使用して、エオシンとメチレンブルーを使用します。この戦略的な組み合わせは優れた結果をもたらしました.

細胞形態の観察に関してはギムザおよびライト着色と同様に作用するが、この技術はマラリア、シャーガス病、リーシュマニア症およびトリコモナス症を引き起こす寄生虫の着色を微調整することによって以前のものを改良する。.

さらに、それは精液の細胞学的研究のための非常に有用な技術であることが証明されています。それは精子の形態学的特徴を示すことによって強調されているだけでなく、非常に効率的に白血球、上皮細胞および精子形成の細胞と区別することを可能にします.

索引

  • 1財団
    • 1.1いろいろな染料
  • 2テクニック
    • 2.1材料
    • 2.2濃厚染料溶液MayGrünwald
    • 2.3濃縮ギムザ染料
    • 2.4 pH 7.2の緩衝液の調製
    • 2.5血液塗抹標本または骨髄染色の手順
    • 2.6精子液の拡張彩色テクニック
    • 2.7重要な仕様
  • 3つの用途
    • 3.1膣細胞診
    • 3.2精子サンプル
  • 4参考文献

財団

この技術はRomanowskyの染みの基礎に従っており、そこでは酸性染料は細胞の塩基性成分に対して選択的親和性を有し、酸性成分は塩基性染料を引き付ける。.

別の言い方をすると、細胞構造と色素の両方が正または負の電荷を持っています。等しい電荷は反発し、異なる電荷は引き付けられます.

例えば、メチレンブルーのような塩基性染料は正に帯電しており、負に帯電した構造によって引き寄せられる。この染料が、負に帯電したリン酸基を持つDNAとRNAに富む核を染色するのはそのためです。.

ＲＮＡを含む単核白血球のセグメント化された好塩基球および細胞質の顆粒もまた染色される。.

同様に、酸性染料は負電荷を帯びているため、赤血球やセグメント化された好酸球の顆粒などの正電荷を帯びた構造と結合します。セグメント化された好中球の顆粒に関しては、これらは両方の染料を固定します.

さまざまな着色剤

この技術では、オルソクロマチック染料とメタクロマチックの間の反応の組み合わせが共存する。オルソクロマティック（エオシンとメチレンブルー）はそれらが関連している細胞構造に結合し、変化しない安定した色を提供します.

一方、メタクロマティックス（メチレンブルーの紺碧のAと紺碧のB）は、特定の構造に結合すると元の色が変わり、色合いもさまざまになります。.

最後に、メイグリュンワルド溶液によって行われる工程は水の存在を必要とする。なぜならそれがなければ染料は構造体を浸透するが固定されないからである。これが起こるためには、染料は極性またはイオン化されなければならず、したがって沈殿して関連構造に付着することができなければならない。.

テクニック

材料

- スライド用スライド.

- 着色橋.

- May-Grünwaldの解.

- ギムザステイン.

- 蒸留水.

濃縮染料溶液MayGrünwald

エオシン - メチレンブルー（メイグリュンワルドによる染料）０．２５ｇを秤量しそしてメタノール１００ｍｌ中に溶解しなければならない。次に混合物を１時間混合し、２４時間静置した。時間が終わったら、フィルタリングする.

この技術を適用するために、メイグリュンワルド染料を次のように希釈しなければならない：２００ｍｌの希釈染料に対して、３０ｍｌの濃縮溶液を測定し、２０ｍｌの緩衝溶液および１５０ｍｌのｐＨ７．２〜７．３に調整した蒸留水を添加する。 。それはそれから混合され、ろ過されます.

濃縮ギムザ染料

０．５ｇのアズール - エオシン - メチレンブルー（ギムザによる染料）を秤量し、５０ｍｌのメタノールに溶解し、そして混合物中に５０ｍｌのグリセリンを入れる。.

テクニックを実行するには、緩衝液で1:10に希釈し、10分間休ませます。必要に応じてフィルタリングすることができます.

pH 7.2の緩衝液の調製

それらは計量されなければなりません：

- リン酸二水素カリウム40 mg（KH 2 PO 4）.

- 151 mgのリン酸水素二ナトリウム12水和物（Na 2 HPO 4）.

両化合物を１００ｍｌの水に溶解する。.

血液塗抹標本または骨髄染色法

2つの様式があります：古典的なものと速いもの.

クラシックモード

  1. 塗抹標本を希釈したMay-Grünwald溶液で2〜3分間覆う.
  2. 前の溶液を除去するために緩衝蒸留水で洗浄する.
  3. 同じ緩衝洗浄液で覆い、１分間放置する。以前の染料は構造に固定されていると同時に、細胞は水和しているという考えです。.
  4. 緩衝化した水に希釈したギムザチンキを12滴加え、よく混ぜて均質化します。 15分から20分.
  5. 塗抹標本を緩衝蒸留水で洗浄し、風乾させる.
  6. 40倍の対物レンズを用いて染色された血球を光学顕微鏡で焦点を合わせて観察する。必要ならば、100Xを使うことができます。.

クイックモード

  1. 塗抹標本を1分間希釈したMayGrünwald染料で覆う.
  2. 緩衝蒸留水で洗浄する.
  3. 緩衝水で覆い、１分間放置する。.
  4. 希釈したギムザ染料を入れて5分間放置する.
  5. 緩衝蒸留水で洗浄し、風乾させる.

ここに記載されている技術は手引きとなる指針ですが、手順と着色時間は試薬を供給する業者によって異なることを考慮に入れなければなりません。それは各商業家によって厳密に示されるステップに従うことが賢明です.

精子液拡張着色法

1-メイグリューンヴァルト溶液の薄層でスプレッドを4分間覆います。.

2-染料を取り除き、蒸留水で洗う.

3-蒸留水に15分間希釈ギムザ（1:10）の層を置きます.

4-染料を取り除き、蒸留水で洗う.

5-乾燥させて顕微鏡で観察する.

重要な仕様

この技術は、細胞構造に対する染料の親和性がゆがまず、そして予想される最終的な色が変化しないように、試薬および洗浄溶液が7.2〜7.3に調整されたpHを有することを必要とする。.

用途

この技術は、末梢血や骨髄、組織切片、細胞診の塗抹標本を染色するために臨床検査室で使用されています。.

血液学の分野では、この技術は形状、大きさ、数の観点から細胞の異常の研究において極めて重要です。それは白血病および貧血症のようなある病気の診断のための非常に貴重な用具です.

さらに、血液学分野で寄生虫を探す際に優れた有用性を発揮します。プラスモジウムsp そして Trypanosoma cruzi）または組織学的（リーシュマニアsp）.

膣細胞診

膣細胞診に関しては、この技術は特に膣の細胞診に有用です。 膣トリコモナス. その存在は癌腫の写真をシミュレートするので、これは重要な発見です。 その場で 寄生虫が除去されるとそれは消えます.

精子サンプル

精子の質に関する貴重な情報を提供するので、精子サンプルの研究に理想的なツールです。.

それが提供するデータは、存在する可能性があり、生殖細胞、白血球、上皮細胞などの非常に重要な付随細胞と同様に、主に数と形態に関係しています.

この分析では、頭、首、真ん中の部分、そして主要部分の精子に観察される異常を説明することができます。.

さらに、それらはまた、精子減少症（精液中の赤血球の存在）および白血球減少症または精子減少症（精液中の白血球数の増加）の症例を示すのを助けることができる。.

参考文献

  1. コスタマグナS、プラドM.フレッシュテストの検証、5月のグリュンワルド - ギムザとグラムの色、および診断用培地 膣トリコモナス. パラシトール。 2001年２５（１−２）：６０−６４。利用可能な場所：scielo.
  2. メルクKGaA研究所顕微鏡用メイグリュンワルドエオシンメチレンブルー.
  3. "メイ - グリュンワルド - ギムザ染色。" ウィキペディア、フリー百科事典. 2018年11月15日、14：37 UTC。 2019年1月8日、4時29分：jp.wikipedia.org
  4. 実験用ガラス化学薬品組織学的技術、血液学および微生物学用の試薬。 glasschemicals.comで入手できます。
  5. Retamales E、ManzoV。血球数を読み取るための血液塗抹標本の染色に関する推奨事項。国立および参照生物医学研究所。チリ公衆衛生研究所.
  6. WHO基準に従ったサラビアL.スペルミモグラム。解剖学と開発の生物学のプログラム。医学部チリ大学で入手可能：pp.centramerica.com