ライトのしみの基礎、材料、技術および用途



の ライグスのしみ は、Romanowskyの汚れから、1902年にアメリカの病理学者James Homer Wrightによって作成された着色技法です。 Romanowskyの染色は不安定だったので、Wrigthは溶剤と固定剤としてメタノールを使用しました。.

この着色は多色性です。つまり、染料が吸収する構造に応じていくつかの色が生成されます。この染色技術は、白血球の示差計数を行い、そして末梢血および骨髄中の赤血球、血小板および白血球の形態を研究するために広く使用されてきた。.

血液のさまざまな細胞株に異常が見られ、白血病や細菌感染症、寄生虫感染症などの病気の診断が容易になるため、その応用は非常に重要です。.

おそらくこれらはこの技術が使用される最も一般的なアプリケーションです、しかしそれらは唯一のものではないです。それはまた、鼻汁、糞便粘液、痰、皮膚などのサンプルのように、血液および骨髄以外のサンプルにおいても有用である。.

索引

  • 1ライトの汚れの基礎
  • 2材料
    • 2.1準備
    • 2.2緩衝化緩衝液
    • 2.3着色を行うために必要な追加の材料
  • 3ライトのしみの成分
    • 3.1メタノール
    • 3.2ショックアブソーバー
    • 3.3エオシン（Y）
    • 3.4メチレンブルー
  • 4テクニック
  • 5実用性
    • 5.1血液学
    • 5.2鼻汁
    • 5.3寄生虫学
    • 5.4呼吸器感染症
    • 5.5細菌学
    • 5.6菌学
  • 6血液サンプルの構造はライト染色でどのように観察されますか？?
  • 良い染色のための7の推奨事項
  • Wrigthカラーリングの8つの一般的な間違い
    • 8.1非常に薄い染色
    • 8.2着色剤の沈殿
    • 8.3非常に赤みがかった色または青い色の塗抹標本
  • 9収納モード
  • 10参考文献

ライトのしみの基礎

ライトの染みは、酸性染料（エオシンY）と塩基性（メチレンブルー）からのメチルアルコールの溶液とその酸化生成物からなるRomanowskyの染みから生まれました。.

ライトの染色に使用される染料の混合物は、ロマノフスキーとして知られる効果を引き起こし、すなわち、それは白血球の核および好中球顆粒に美しい紫色の着色を与え、一方赤血球はピンクに染色される。.

ライトの染色に典型的な色の範囲を与える原因となる成分は、青BとエオシンYです。観察された効果は、化学構造への色素の結合と青BとエオシンYの相互作用に依存します。.

核酸、核タンパク質、一部の細胞型の反応性未成熟細胞質などの酸性構造、フィックスブルーB（塩基性染料）.

ヘモグロビン、セグメント化された好酸球の顆粒などの基本構造は、他の細胞構造の中でも、エオシンY（酸性染料）を固定します。.

染色の結果は、ライト染料のpH、バッファー、洗浄液など、さまざまな要因の影響を受けます。染色および固定時間.

したがって、試薬の調製における各ステップは非常に重要であり、あらゆる細部に注意して行わなければなりません。.

材料

ライトカラーリング。 100 mLの場合は必須です。

０．３ｇのライト染料を秤量し、９７ｍｌのメタノールおよび３ｍｌのグリセロールを計量する。.

準備

乳鉢に大量のライト染料を入れ、粉末が完全に溶解するまでグリセロールをゆっくり加える。.

次にメタノールを添加し、混合し、琥珀色の瓶に注ぐ。.

ソリューションを使用する前に穏やかな動きとフィルターで振ってください.

バッファードバッファー

１リットルの蒸留水に、３．７６ｇの二リン酸二ナトリウム（Ｎａ2HPO4   2H20）プラス2.1グラムのリン酸二水素カリウム（KH）2PO4）.

取り込まれた試薬がすべて溶解するまでよく混ぜます。 ｐＨを７．２に調整する。ガラス瓶に注ぎ、室温に保つ.

着色を行うために必要な追加の材料

さらに、他の材料が着色技術を実行するために必要とされます：これらは以下を含みます：物を運ぶシートまたは物を覆う着色、水または洗浄のための緩衝液でのピセタス（吸収紙、ガーゼまたは綿）.

ライトステイン成分

メタノール

アルコール（メタノール）は、スライドへの血液塗抹標本の固定剤として機能します。.

基本的にそれは還元剤、脱水剤および凝固剤固定剤です。したがって、その機能は、タンパク質を凝固させて不溶性にすることですが、タンパク質を変性させることはありません。.

メタノールは、エタノールで得られるものよりも優れた結果が得られるため、すべてのラボで塗抹標本を修正するために最も広く使用されている試薬です。理想的な濃度は99％です.

ショックアブソーバー

7.2に調整されたpHは、細胞構造が色素を適切に吸収するために不可欠であるため、緩衝液（緩衝液）は、色素のpHを調整または維持する機能を有する。.

他方、メタノール固定の通過は細胞を脱水し、緩衝液はそれらを再水和するのを助ける。.

エオシン（Y）

エオシンは酸性染料であるため、エオシンは塩基性成分と親和性があります。 2つのタイプのエオシンは互いに非常に似ているので、どちらか一方を使用しても同じ結果が得られます。.

一方はエオシンY、黄色エオシンまたはテトラブロモフルオレセインと呼ばれ、もう一方のエオシンB、青みがかったエリスロシンBまたはジブロモジニトロフルオレセインと呼ばれます。しかし、エオシンYが最も一般的に使用されています.

この染料の最も重要な特性は、その負の極性です、これは正電荷を持つ細胞構造によって引き寄せられます.

メチレンブルー

基本的なカラーリングです。その主な特性は変色性であり、すなわち、すべての構造が同じ色に染色されるわけではない、それはそれが着色している​​ことを構造の化学組成に依存する.

いくつかのライトまたはダークブルーと他の暗い紫色または淡いライラックになります.

テクニック

1-スライドまたはカバーガラスのいずれかに薄いフィルムが残るようにサンプルの広がりを行う.

2 - 約2時間風乾させる.

3 - サンプルを上に広げた状態で、乾いた塗抹標本を染色ブリッジまたは染色トレイに置く.

それが表面全体を覆うまで４滴ずつライト染料でシートを覆う。 5 - 8分そのまま.

5 - 染料はスライドを完全に覆い、端からはみ出さないようにします。着色時間の間にそれが蒸発し始めるならば、追加の滴は置かれるべきです.

6 - 続いて同量のショックアブソーバーを加え、特徴的な金属光沢が現れるまで少し吹きます。 10〜15分かかります.

シートがピンクに見えるまでソフトジェットを置き、水道水で7回洗浄する。.

8 - アルコールを染み込ませたガーゼで、スライドの裏側に付いている染料を取り除きます。.

9-顕微鏡でそれを可視化するために液浸油を配置する前に塗抹標本を非常によく乾かす.

効用

血液学

末梢血塗抹標本の塗りつけ、厚膜塗抹標本の検査、および骨髄サンプルからの細胞の研究に最適です。.

染料のこの組み合わせの化学的性質により、細胞構造は容易に認識することができ、存在する異なる種類の細胞を区別することができる。.

鼻汁

この技術は、アレルギー性鼻炎の診断において鼻分泌物の細胞（上皮細胞、分裂した好酸球、多形核）を特定するのに非常に有用です。.

寄生虫学

この意味で、それはの研究に役立っています リーシュマニアsp 皮膚潰瘍の皮下細胞組織の組織球内で。同様に、便試料中の白血球を識別するために使用されます（糞便白血球図）。.

この場合、糞便中に存在する白血球増加症が多形核または単核によるものであるかどうかを知ることは医師にとって興味深いことです。それがそれぞれ細菌性またはウイルス性感染であるかどうかは、便白血球中のこの所見がガイドします.

一方、血中を循環する寄生虫は、赤血球内に見られるか、血漿中に遊離しています。欲しい寄生虫は マラリア原虫種、Trypanosoma cruzii そしてフィラリア、そして獣医学でそれはの検索に役立ちます Theileria equi そして バベシアカバリ, 特にウマの赤ちゃんの原因物質.

ライトおよびギムザ染色は、ヘモ寄生虫を正常な細胞成分と区別することができる。これには、2種類のスプレッドを使用できます。

細かいストレッチ

血液はスライド上の薄いフィルムのように広がる。核の染色と細胞質の特徴を明らかにするライトの染色で染色.

厚いドロップ

この方法論は、大量の血液中の寄生虫の存在を調査するために使用されます.

このために、大量の血液をスライドに載せます。そこに来たら、別のスライドの端を使用して、中心から外側に向かってますます大きい円を作成しながら、除細動する必要があります。.

最後に、厚い塗抹標本の寄生虫を観察するために、赤血球は水で溶解されなければなりません.

呼吸器感染症

呼吸器レベルでは、この方法は唾液サンプル、気管支または気管支肺胞洗浄液中に存在する細胞が診断を確定するために重要であるためにも有用です。.

同様に、多形核細胞および単核細胞もここで区別することができる。.

細菌学

バクテリア学におけるこの技術の使用は制限されています、なぜならそれはバクテリアを染色するのには良くないからです。それはそれらの染色のために他の特殊な着色技術が使われる理由です.

しかしながら、それは封入体を有する上皮細胞を探すために使用されてきた。 クラミジアトラコマチス それがこれのための最善の方法ではないことを認識しなければならないが、尿道または子宮頸管内粘膜の塗抹標本で.

赤血球の中でらせん型細菌を観察することも可能です。 ボレリアブルグドルフェリ 感染した患者、ならびに桑実胚または封入体 エーリキアsp 血液塗抹標本中のリンパ球、単球または好中球の細胞質中.

菌学

の Histoplasma capsulatum ライト染色で染色された、様々な組織サンプルの顕微鏡観察によって頻繁に診断される病原性真菌です。.

ライトの染色で血液サンプルの構造はどのように観察されますか?

良い染色のための推奨事項

血液サンプルの増量分は自然乾燥させるべきです。塗抹標本は、色素をよりよく固定し、過剰着色を避けるために、できるだけ薄くする必要があります。.

高品質の染色のためには、塗抹標本の調製後２時間以内に染色を行うことが賢明である。一方、理想的なサンプルは、抗凝固剤を含まない毛細血管血です。.

しかし、静脈血を使用する場合、後者は細胞構造を変形させる可能性があるため、ヘパリンではなくEDTA抗凝固剤として使用する必要があります。.

調製された着色剤の劣化を防ぐために乾燥した場所に保存する必要があります.

洗浄中は中性pHに調整した水の使用をお勧めします。.

最後に、実験室で使われている染色方法を時々テストすることをお勧めします。.

これは、品質管理として、サンプルまたは拡張パターンを染色することによって行われます。染色が適切に準備され、着色時間がよく標準化されていることを確認するので、このステップは重要です。.

パターンシートの色が悪い場合は、解決しなければならない問題があります。.

Wrigthカラーリングの一般的な間違い

非常に薄い染色

非常に薄いスミア、通常は非常に短い時間の染色または非常に誇張された洗浄による。染料との接触時間を長くするか、洗浄時間を短くすることで補正されます。.

染料沈殿物

塗抹標本に染料の沈殿物が存在すると、いくつかの原因が考えられますが、最も一般的な原因は、フィルタ処理されていない染料の使用、色むらのある橋の汚れ、ほこりやグリースの付いた汚れたシートの使用です。染色を終える.

非常に赤味がかった色または青い色の塗抹標本

緩衝剤は着色剤のｐＨに関与する。示された（酸）より低いｐＨを有する染料は非常に赤いスミアを生じるであろう。.

染料のpHが（アルカリ性）より高い場合、非常に青みがかったスミアが得られます。.

保管モード

試薬は室温で保存する必要があります.

参考文献

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  6. Retamales E、Mazo V.公衆衛生研究所チリ政府。血球数を読むために血液塗抹標本を染色するための推奨事項.