Ziehl-Neelsen Stain Foundation、試薬およびテクニック



の ジール - ネールセン染色 アルコール耐性微生物（AAR）を識別するための着色技術。この微生物学的手法の名前はその作者を指しています：細菌学者Franz Ziehlと病理学者Friedrich Neelsen.

このテクニックは一種のディファレンシャルカラーリングです。これは、観察し、識別し、後で識別したい構造間のコントラストを作り出すために異なる染料を使用することを意味します。 Ziehl-Neelsen染色はある種の微生物の同定に使用されます.

これらの微生物のいくつかはマイコバクテリアです（例えば, 結核菌）、ノカルジア（例えば, ノカルジア sp。）といくつかの単細胞寄生虫, Cryptosporidium parvum）細菌の多くはグラム染色と呼ばれる一般的な手法で分類できます。.

しかしながら、いくつかの細菌群はそれらを同定するために他の方法を必要とする。 Ziehl-Neelsen染色などの技術では、最初の細胞壁を固定するために熱と染料の組み合わせが必要です。.

それから2つの結果を可能にする変色プロセスは来ます：酸およびアルコールによる変色に対する抵抗か感受性.

索引

  • 1財団
    • 1.1二次着色
  • 2試薬
    • 2.1一次着色
    • 2.2脱色ソリューション
    • 2.3二次着色（着色防止剤）
  • 3テクニック
    • 3.1抗酸性染色手順
  • 4参考文献

財団

この染色技術の基礎はこれらの微生物の細胞壁特性に基づいています。壁はミコール酸と呼ばれる一種の脂肪酸によって形成されています。これらは非常に長い鎖を特徴としています.

脂肪酸が非常に長い構造を有するとき、それらは染料をより容易に保持することができる。いくつかの属の細菌は、細胞壁のミコール酸含有量が高いため、グラム染色では染色するのが非常に困難です。.

Ziehl-Neelsen染色では、塩基性染料であるフェノール化合物のカルボルフクシンが使用されています。これは細胞壁の脂肪酸と相互作用する能力を持っています。.

ワックスが溶けて染料分子が細胞壁に向かってより速く移動するので、カルボフクシン染色は熱の存在下で改善される.

後で使用される酸は、それらの壁が着色剤と十分に関連していなかったために染色されなかった細胞を変色させるのに役立つ。それ故、酸脱色剤の強度は酸性染料を除去することができる。この変色に抵抗する細胞は、耐酸性と呼ばれています.

二次着色

サンプルの変色後、これは二次染料と呼ばれる別の染料と対比されます。メチレンブルーまたはマラカイトグリーンが一般的に使用されています.

二次染料は背景材料を染色し、そしてその結果として、第一工程で染色された構造とは対照的にコントラストを作り出す。変色した細胞だけが二次染料（抗汚染）を吸収して色をとりますが、耐酸性細胞は赤色を保ちます。.

この手順は頻繁に識別のために使用されます 結核菌 そして Mycobacterium leprae, 抗酸菌と呼ばれるもの.

試薬

一次着色

カルボキシン０．３％フクシン（濾過）を使用する。この染料はアルコールの混合物：エタノール中のフェノール（９０％）またはメタノール（９５％）から調製され、そしてこの混合物中に３グラムの塩基性フクシンが溶解される。.

脱色ソリューション

このステップでは、3％アルコール酸または25％硫酸の溶液を使用できます。.

二次着色剤（着色防止剤）

試料中でコントラストを達成するために最も一般的に使用される染料は通常０．３％メチレンブルーである。しかしながら、０．５％マラカイトグリーンのような他のものも使用することができる。.

テクニック

耐酸性染色手順

細菌塗抹標本を準備する

この準備は無菌予防措置に従って、清潔で乾燥したスライド上で行われる.

塗抹標本を乾燥させる

塗抹標本を室温で乾燥させる.

サンプルを加熱する

下のスライドに火をつけてサンプルを加熱する必要があります。塗抹標本が痰で（白くするために次亜塩素酸ナトリウムで処理されて）調製されていない場合、およびそれが直ちに染色されない場合は、アルコールで固定することができる。.

結核菌 それは漂白剤でそして染色プロセスの間に除去されます。未処理の痰を熱固定しても死にません 結核菌, 一方アルコールによる固定は殺菌性です.

汚れをカバー

染みは、カルボフクシン溶液（一次塩基性染み）で覆われている.

汚れを加熱する

これは5分間行われます。蒸気の放出（約60℃）に気付くはずです。過熱しないようにし、サンプルの燃焼を避けることが重要です.

染みの加熱に関しては、フクシンカルボコールを加熱するとき、特に前の染みから引火性の高い化学物質が収集されているトレイまたは他の容器の上で染みが行われる場合には、特に注意が必要です。.

数滴の酸性アルコール、メタノール、または70％エタノールで湿らせた火をつけた綿棒を使用して、スライドの下に小さな炎だけを当てます。これは火災の危険があるため、エタノールに浸した大きな綿棒の使用は避けてください。.

汚れを洗う

この洗浄はきれいな水で行わなければなりません。水道水がきれいでない場合は、塗抹標本を濾過または蒸留水で洗います。.

塗抹標本を酸性アルコールで覆う

この酸性アルコールは3％であるべきです。塗布は５分間または塗抹標本が十分に変色するまで、すなわち淡いピンク色まで行われる。.

酸性アルコールは可燃性であることを考慮に入れる必要があります。したがって、それは非常に慎重に使用されなければなりません。発火源の近くにいることを避ける.

汚れを洗う

洗浄はきれいな蒸留水で行ってください.

塗抹標本を染料で覆う

塗抹標本が薄い場合は最も長い時間を使用して、1〜2分間グリーンマラカイト（0.5％）またはメチレンブルー（0.3％）の色素になります。.

汚れを洗う

きれいな水をもう一度使用する必要があります（蒸留）.

排水する

スライドの裏側はきれいにし、汚れは排水棚の上に置いて風乾させる必要があります（乾燥に吸収紙は使用しないでください）。.

顕微鏡で塗抹標本を調べる

100倍対物レンズと液浸油を使用してください。塗抹標本を体系的にスキャンして、関連する観察結果を書き留めます。.

結果を解釈する

理論的には、赤みがかった色に染まっている微生物は、耐酸性陽性（AAR +）と見なされます。.

逆に、微生物が対色素として使用される色素に応じて青または緑に染色されている場合、それらはネガティブアルコール耐性酸（AAR-）と見なされます.

参考文献

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